罗胜男，苏震，黄佩佩，陈如意，左一丹，胡菲菲

    (温州医科大学附属第一医院 肾内科，浙江 温州 325015)

    糖尿病患者持续高血糖状态可引起骨骼肌萎缩，称为糖尿病肌病[1]，临床表现为肌肉量减少，肌肉无力和身体机能下降[2]。蛋白质代谢紊乱导致肌 肉质量和功能的下降是糖尿病管理中最具挑战性的问题之一。胰岛素可抑制蛋白分解并促进蛋白合成，调节机体血糖水平。1型糖尿病出现骨骼肌萎缩主要由胰岛素缺乏引起，而2型糖尿病则是因为骨骼肌对胰岛素敏感性下降，泛素-蛋白酶系统和自噬-溶酶体系统活性增高，蛋白质代谢失衡[3]。自噬是介导细胞内功能失调的细胞器和蛋白质降解的重要分解代谢机制[4]，当自噬被过度活化，蛋白质被过度降解，肌纤维功能受损，最终导致骨骼肌萎缩。高剂量葡萄糖对骨骼肌细胞自噬稳态的影响尚不清楚，本研究主要探索高剂量葡萄糖对骨骼肌自噬的影响，同时通过动态监测自噬流，进一步比较高剂量葡萄糖作用不同时间自噬表达差异。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 C2C12细胞株及慢病毒：小鼠C2C12成肌细胞株购自中国科学院细胞库，货号GNM26，使用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的DMEM培养液(美国Gibco公司)培养，置于37 ℃，5% CO2恒温孵育箱中。串联荧光标记LC3(mRFP-GFPLC3)慢病毒购自上海吉凯基因有限公司。

    1.1.2 试剂：Western blot一抗包括：抗LC3B购自美国Abcam公司，抗Beclin-1购自美国Cell Signaling Technology公司，抗体稀释度为1:2 000和1:1 000。抗β-actin购自美国Cell Signaling Technology公司，抗体稀释度为1:1 000。PCR引物包括：LC3上游引物：5’-GCCTGTCCTGGATAAGACCAA-3’和下游引物：5’-ACCATGCTGTGCTGGTTGAC-3’。Beclin-1 上游引物：5’-AACTCGCCAGGATGGTGTCT-3’和下游引物：5’-CTTGAGTCTCCGGCTGAGGT-3’。

    1.2 方法

    1.2.1 C2C12细胞培养、诱导分化和实验处理: 当C2C12成肌细胞融合达70%～80%，更换为含2%马血清的分化培养基培养2 d ......