曹焱帆，章可可，张燕妮，汤丰瑜，胡凤婷，叶青松

    (温州医科大学 口腔医学院 干细胞与组织工程研究所，浙江 温州 325035)

    生物膜是指黏附于组织表面，并包裹在由微生物产生的胞外复合物中的微生物膜性聚集体[1]。在微生物引起的体内感染中，以生物膜形式的感染占比超过80%[2]。生物膜的屏障作用可以阻碍治疗药物进入生物膜并作用于微生物，使得生物膜状态下的微生物对抗生素的抗性比浮游微生物提高了近千倍[3]。伴随着耐药性问题浮现，抗生素的地位正面临巨大威胁[4]。去甲亚精胺是一种多胺分子，这种多胺分子在原核和真核生物中普遍存在，是细胞生长所需的一种多胺[5]。早期研究发现去甲亚精胺在霍乱弧菌生物膜的形成过程中起到促进作用[6]。随后有许多的研究证实去甲亚精胺能抑制细菌生物膜形成。但是对真菌生物膜形成方面的研究较少，因此本实验将口腔常见真菌(白色念珠菌)作为研究对象，探讨去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的作用及机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株：实验所用菌株是白色念珠菌(Candida albicans，C.Albicans)SC5314，由温州医科大学口腔医学院口腔研究所提供。

    1.1.2 仪器和试剂：紫外可见分光光度计(上海仪电分析仪器有限公司)；全波长微孔板读数板机(美国Thermo Fisher公司)；体式显微镜(日本Nikon公司)；高真空离子溅射仪(瑞士Leica公司)；场发射扫描电镜(scanning electron microscope，SEM；日本Hitachi公司)；定量PCR仪器(美国Life Technologies公司)；去甲亚精胺(美国Sigma公司)；RPMI1640培养基(美国Gibco公司)；甲基四氮盐(XTT，美国Life Technologies公司)；4-丙磺酸基吗啉(MOPS)、结晶紫染色剂、沙氏琼脂培养基、PBS(北京Solarbio公司)；甲基丙烯酸树脂(上海张江生物材料有限公司)；50%戊二醛(北京百灵威科技有限公司)；TRIzol(美国Thermo Fisher公司)；反转录及RT-PCR相关试剂(大连TaKaRa公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 结晶紫染色：梯度稀释的去甲亚精胺和白色念珠菌悬液共同培养，观察生物膜量的形成。去甲亚精胺溶液在96孔细胞培养板内对倍稀释，设置为实验组，使其最终浓度范围为3.5～893.6 mmol/L。 0 mmol/L去甲亚精胺的RPMI1640培养基[7]作为对照组1；80.0 μmol/L氟康唑的RPMI培养基用作对照组2[8]；13.4 mmol/L无水乙醇(氟康唑溶剂)的RPMI1640培养基用作对照组3 ......