李海英，周斌，吴建波，邢冲云

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.中心实验室；2.血液内科)

    AML1-ETO易位是急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)中最常见的染色体异常之一。由此产生的AML1-ETO融合蛋白由野生型AML1蛋白的NH2末端部分和几乎整个ETO蛋白质序列组成，AML1-ETO通过抑制正常的AML1功能在白血病转化中发挥起始和关键性作用[1]。AML1-ETO与其他基因突变如CEBPA[2]、c-kit[3]或RTK[4]协同迅速诱导白血病的发生。

    和厚朴酚(Honokiol，HNK)是一种从植物厚朴的茎和皮中分离得到的天然酚类化合物[5]，能通过靶向多种信号传导分子包括Wnt1-β-catenin[6]、JAK2/STAT3[7-8]和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)[9]，发挥抗肿瘤和抗血管生成活性。我们已经报道过HNK对AML有治疗作用[10]，并在前期实验中发现HNK能引起AML1-ETO蛋白的降解。本实验旨在研究HNK降解AML1-ETO蛋白的可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 细胞培养 人AML1-ETO+白血病细胞株Kasumi-1 购自ATCC，培养在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中。分别将10、20、40 μmol/L HNK加入细胞上清液中，待24 h和48 h后提取mRNA和蛋白。10 μg/mL放线菌酮(美国Sigma公司)分别加入含或不含40 μmol/L HNK的Kasumi-1细胞中，于0、4、8、12、16、24 h提取蛋白进行检测。

    1.2 Western blot检测相关蛋白的表达 相关抗体包括AML1(美国CST公司)、ETO(美国Santa Cruz Bio-technology公司)、UbcH8(美国Abcam公司)、β-actin(德国Merck Millipore公司)。按标准流程操作，在Bio-Rad ChemiDoc XRS+化学发光成像系统上拍照 ......