张学铭，陈俊豪，陈雷，李晓航，汪开诚，林琼琼，金可可

    (1.温州医科大学 病理学与病理生理学教研室，浙江 温州 325035；2.University of Western Australia，Perth WA6009；3.温州医科大学附属第一医院 骨科，浙江 温州 325015；4.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；5.温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 病理科，浙江 温州 325027)

    骨缺损、骨不愈是临床上常见的骨科难治性疾病，近年来骨组织工程技术的不断发展为骨缺损的治疗提供了新的方法和理念，其基本原理是制备优良的支架材料以搭载合适的种子细胞及生物因子，完成目标区域的功能重建[1]。骨膜具有较强的成骨能力，在骨折愈合修复方面具有重要作用，被认为是促进骨移植材料在移植区域发挥修复作用的始动因素[2]。骨膜去细胞生物支架去除了具有免疫源性的细胞成分并基本保留了细胞外基质的三维空间结构和重要组分，在异体皮下包埋实验中展现出了良好的生物相容性[3]。研究表明支架材料是诱导种子细胞黏附、增殖、分化并维持功能的重要载体，其血管化是实现组织工程体外培养构建与体内移植的重要途径，是去细胞骨膜支架发挥生理功能的关键因素[4-5]。目前对于骨膜去细胞生物支架的血管化研究国内外罕见报道，因此本实验观察去细胞骨膜支架在小鼠股骨缺损模型中血管形成的作用及其对骨缺损的修复效果，并探讨其血管化的机制，以期为后续该支架应用于治疗骨缺损、骨不愈提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 健康6周龄雄性C57BL/6小鼠64只，体质量(23±3)g；健康4月龄雄性新西兰白兔30只，体质量(2.00±0.25)kg，由温州医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK(浙)2015-0009。动物实验严格按照科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》执行。

    1.2 主要试剂和仪器 聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，SDS)、脱氧核糖核酸酶I(deoxyribonuclease I，DNase 1，美国Sigma公司)；碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor ......