宋志纯，戴数，王朋，高基民

    (1.丽水市人民医院 检验科，浙江 丽水 323000；2.温州医科大学 检验医学院 生命科学学院，浙江 温州 325035)

    恶性肿瘤严重威胁人类健康，我国每年新发肿瘤病例达430余万例，死亡280多万例[1]，肿瘤疫苗可诱发自身特异性免疫应答，抑制并清除肿瘤[2]，因特异性高、针对性强、不良反应小、安全稳定，已经成为恶性肿瘤治疗的重要方法。通过基因修饰、细胞表面锚定修饰将细胞因子修饰到肿瘤细胞是肿瘤疫苗新的发展方向[3]。

    巨噬细胞炎性蛋白3α(macrophage inflammatory protein-3α，MIP-3α)又称CCL20，可参与树突状细胞、T细胞的定向迁移，在肿瘤免疫方面发挥作用[4]。它的转基因细胞能诱导肿瘤特异性细胞免疫，抑制肿瘤生长、延长荷瘤小鼠的生存期[5]。另外，瘤内直接注射MIP-3α可使DC和CD8+T细胞浸润到肿瘤实质内，抑制肿瘤生长的作用显著[6]。链亲和素(streptavidin，SA)是由链霉菌分泌的四聚体蛋白，能与生物素快速紧密不可逆结合，其结合力比抗原抗体间的亲和力高1万倍，可应用于生物医学的诸多领域[7]。

    利用肿瘤细胞表面极易生物素化及SA能与生物素高效而超强结合的特性[8]，我们制备了SA标记的MIP-3α融合蛋白，使其锚定在已生物素化的肿瘤细胞表面，并产生有效的抗肿瘤免疫作用。基于人与鼠的氨基酸同源性为73%，而该肿瘤细胞疫苗的抗肿瘤效应需要在小鼠体内进行检测，为此我们构建了MIP-3α-SA-PET21重组表达载体，并在大肠杆菌内高效诱导表达获得融合蛋白，经纯化、复性后对其生物学活性进行了研究。该研究为MIP-3α表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗提供了实验基础，为后续的临床实验提供了依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株和细胞：E.coliRosetta(DE3)、DH5α购自北京Novagen公司，MIP-3α-SA-PET21质粒及RM-1细胞由本实验室保存。

    1.1.2 试剂：IPTG及氨苄霉素、青链霉素、氯霉素购自美国Sigma公司，Sulfo-NHS-L C-Biotn购自美国Pierce公司，Ni-NTA螯合层析填料购自德国Qiagen公司，Transwell趋化小室购自美国Corning公司，抗-HIS单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG、FITC标记羊抗鼠IgG、DAB显色试剂盒、硝酸纤维素膜均购自上海碧云天公司，胎牛血清及RPMI1640培养基购自杭州四季青生物工程材料有限公司 ......