PDX通过P38 MAPK通路促进脓毒症性ARDS抗菌肽cathelicidin表达
盲肠,1材料和方法,2结果,3讨论
谷丽君,潘静怡,MOHAMED ALI Abdullahi,金胜威(温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 麻醉科,浙江 温州 325027)
抗菌肽是宿主在抵御外来生物入侵时固有免疫屏障产生的小分子多肽,能广谱抗菌[1-2]并调节免疫反应[3],其中抗菌肽cathelicidin(cathelicidin antimicrobial peptide,CAMP)是主要抗菌肽家族之一。炎症具有防御和损伤双重效应,炎症后期机体通过主动产生促炎症消退介质及时限制过度炎症反应,恢复机体免疫稳态[4-6]。Protectin DX(PDX)是来源于二十二碳六烯(docosahexaenoic acid,DHA)的促炎症消退介质,在多种炎症模型中均有抗炎促消退作用[7-9]。已有研究表明促炎症消退介质脂氧素、消退素能促进抗菌肽的表达[10-12],然而PDX对CAMP的影响尚不清楚,本研究主要探索PDX对CAMP的影响及其具体机制。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物:雄性C57BL/6小鼠,6~10周龄,体质量为23~25 g,购自上海斯莱克实验动物公司,所有动物均饲养于温州医科大学实验动物中心,动物许可证编号:SYXK(浙)2018-103。
1.1.2 主要试剂:PDX购于美国Sigma公司,SB203580购于美国MCE公司,反转录试剂盒、RT-PCR试剂盒购于美国Thermo公司,TRIzol购于美国Invitrogen公司,CAMP、hsp 70、serpina 3、lysozyme基因购于上海生工生物有限公司,cathelicidin抗体、GAPDH抗体购于美国Abcam公司,ERK、P38相关抗体购于美国CST公司,β-actin多克隆抗体购于美国Santa Cruz公司。
1.2 方法
1.2.1 动物处理及分组:盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型:麻醉小鼠至无夹持反应,剖腹探查找到盲肠,在回盲瓣至盲肠末端中间处用外科线结扎肠管,20 G针头从肠系膜刺向游离侧,并对穿。用镊子轻柔挤压肠管,挤出适量肠内容物。回纳盲肠,依次缝合腹膜,肌肉,皮肤 ......
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