童民锋，杨帆，刘继红，徐虎

    (金华市中心医院 神经外科，浙江 金华 321000)

    脑胶质瘤是常见的颅内原发性恶性肿瘤，因其具有高度恶性生物学行为，临床治疗效果往往不佳[1]。替莫唑胺(temozolomide，TMZ)是一种亲脂性小分子，能高效透过血脑屏障，引起碱基错配导致DNA断裂进而抑制肿瘤细胞生长最终导致细胞死亡，为胶质瘤治疗的一线化疗药[2]。越来越多研究发现，肿瘤内存在一部分具有自我更新能力、多向分化潜能及更强体内成瘤能力的细胞—肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)[3]。研究报道，脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells，GSCs)是脑胶质瘤对包括TMZ在内的传统化疗耐受的重要因素[4]。如何遏制脑胶质瘤对化疗药物耐受是临床治疗的关键所在。长链非编码RNA(lncRNA)是转录长度在200 nt～100 kb的非编码RNA，许多lncRNA异常表达于肿瘤，并且影响包括脑胶质瘤在内的多种恶性肿瘤发生发展[5]。lncRNA BC200(以下简称BC200)是lncRNA大家族的一员，临床研究显示其在高侵袭性乳腺癌及卵巢癌、宫颈癌中高度上调[6]，但BC200与脑胶质瘤干性的关系还未有研究报道。本研究以脑胶质瘤U87 MG细胞为研究模型培养分离GSCs，siRNA干扰BC200并观察GSCs对TMZ的敏感性，为临床脑胶质瘤治疗提供理论支持。

    1 材料和方法

    1.1 材料 U87 MG胶质瘤细胞系购自中国科学院上海细胞库。DMEM和无血清干细胞培养基DMEM购自美国Invitrogen公司；EGF、bFGF和胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；羊抗兔CD133、羊抗鼠Bax、羊抗鼠Bcl-2和羊抗鼠cleaved caspase-3、羊抗兔GAPDH购自美国Cell Signaling公司；辣根过氧化酶标记的鼠和兔二抗购自美国Bioworld公司；蛋白提取试剂盒及细胞裂解液购自北京碧云天公司；BC200 siRNA购自上海吉玛公司；TMZ购自美国Sigma公司 ......