陈世钻，俞富祥，陈俊予，唐银河

    (温州医科大学附属第一医院 肝胆外科，浙江 温州 325015)

    我国是慢性肝病大国，更是肝恶性肿瘤的高发国家。严重慢性肝病和肝恶性肿瘤的晚期需要肝脏移植治疗[1]。肝移植治疗对肝脏供体的巨大需求与肝脏供体的严重短缺形成了巨大反差[2]，因此，肝脏再生的研究刻不容缓。肝脏再生一直是肝脏疾病研究中的重要环节，但经过多年的探索对其机制仍是知之甚少，一个重要的原因是缺乏一个简单方便的可重复的肝再生动物模型。2014年JIANG等[3]利用整个肝脏组织去细胞制备成去细胞支架。此后又有多个研究小组报道运用各种去细胞方式制备去细胞支架[4]，但目前仍未有简单可重复的肝脏再生模型。本研究旨在探究新型大鼠肝脏再生模型，为肝脏再生及肝脏移植的研究奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 雄性SD大鼠，体质量200～250 g，由温州医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK(浙)2015-0009。普通饲料喂养，实验前禁食12 h。

    1.2 主要试剂及仪器 DMEM培养液购自美国Sigma公司，胰蛋白酶消化液、Triton X-100、Percoll分离液、IV胶原酶、内皮素-1(endothelin-1，ET-1)一抗、ET-1二抗、DAPI染液、肝细胞细胞角蛋白18(cytokeratin 18，CK-18)一抗、CK-18二抗、DAB显色试剂盒购自北京Solarbio公司，倒置荧光显微镜购自广州明美光电有限公司，密度梯度离心机购自长沙英泰仪器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 肝细胞分离：取SD大鼠，用75%乙醇浸泡消毒5 min后，在无菌条件下取出肝脏，剪碎，并用Hanks液反复清洗3次后，用0.1%的IV型胶原酶消化30 min，此后用3倍体积的完全培养基终止消化，最后将组织悬液经100目钢网过滤 ......