陆素文，胡碧波，邓辉

    (温州医科大学附属口腔医院 牙周科，浙江 温州 325027)

    牙周膜细胞(periodontal ligament cells，PDLCs)作为牙周膜的主要细胞，在张应力作用下可骨向分化，是牙槽骨改建的重要效应细胞[1-2]。然而，PDLCs如何感知力学信号并转化为生化信号，亟待阐明。核心结合因子α1(core binding factor α1，Cbfα1)是重要的成骨特异性转录因子之一[3]，含有RUNT结构域，与DNA上的OSE2序列结合后，启动骨钙素(osteocalcin，OCN)、锌指结构转录因子(osterix，OSX)、I型胶原(collagen type I，COL I)等成骨特异性基因的转录，从而促进骨向分化[4]，在骨形成中发挥重要作用[5]。目前对于Cbfα1活化的上游机制还知之甚少。

    TAZ(PDZ binding transcriptional activator of transcription)即PDZ结合基序转录共激活因子，是Hippo信号通路下游的关键效应蛋白，在感知及介导机械信号过程中扮演重要角色。未发生磷酸化的TAZ进入细胞核后结合含有Pro-Pro-X-Tyr保守序列的转录因子，调控其转录活性[6]。研究已证实TAZ是Cbfα1的转录共激活因子，且与骨向分化调控有关[7-8]。新近关于TAZ作为细胞外机械信号传感器参与细胞分化的研究已成为研究热点。然而TAZ是否通过调控Cbfα1从而参与应力所促进的PDLCs的骨向分化，目前未见报道。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂：胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，DMEM培养基(美国Gibco公司)，二甲基亚砜、地塞米松、甘油磷酸钠、抗坏血酸(美国Sigma公司)，引物(上海捷瑞生物工程有 限公司)，TRIzol Reagent(美国Invitrogen公司)，反转录试剂盒(日本Takara公司)，TAZ、Cbfα1、COL I抗体(美国Santa Cruz公司)，OSX抗体(英国Abcam公司)，OCN抗体(美国Milipore公司)，GAPDH抗体(上海康成生物工程有限公司)，波形蛋白、角形蛋白抗体(武汉博士德生物工程有限公司)，BCA蛋白浓度试剂盒、Lipofectamine 6 000(上海碧云天公司)。

    1.1.2 主要仪器：低温高速离心机(美国Beckman公司) ......