陈超蕾，林雨婷，张桑桑，宋晨剑，何飞，董莉，陈俊杰，王蓓蓓，董年，李玉苹，陈成水

    (1.温州医科大学附属第一医院 呼吸与危重症医学科，浙江 温州 325015；2.温州市中西医结合医院心血管内科，浙江 温州 325000)

    急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是一种常见、严重的临床疾病，其发展至严重阶段时被称为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)[1]。致病因素可导致肺泡-毛细血管细胞屏障的非特异性损伤，从而造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，最终引起急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。其发病机制错综复杂[2]，涉及中性粒细胞等炎症细胞肺内浸润、肺血管内皮细胞和气管上皮细胞、肺泡上皮细胞的损伤、肺间质成分及肺泡水肿等[3]。我们的肺损伤动物模型研究表明:气道内局部给予磷脂酰肌醇-3-羟激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase，PI3K)抑制剂比全身给药更能预防和减轻脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)及胰蛋白酶诱导的肺损伤作用，提示气道局部炎症可能是肺损伤发生发展的重要环节[4]。

    近期，我们在研究临床ALI/ARDS患者血液蛋白谱检测时，发现并筛选出许多ALI/ARDS相关特异性蛋白[5]。其中磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3，GPC3)在肺炎相关ALI/ARDS患者血清中含量急剧升高。但GPC3在ALI中扮演何种角色，其通过何种信号途径参与肺损伤疾病的发生尚不明确。

    本研究采用LPS经气道滴入制造小鼠ALI模型后研究GPC3表达水平及位置，随后予LPS刺激人肺上皮细胞16HBE，研究局部细胞炎症时GPC3及各种炎症因子的表达，同时给予外源性GPC3，研究GPC3对肺局部细胞炎症的影响，通过抑制GPC3-WNT通路，分析GPC3-WNT通路在局部炎症的调控作用，初步探讨相关的分子机制，为明确GPC3在LPS诱导的ALI中的作用及涉及的信号途径提供理论依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物:20～25 g(6～8周)雄性C57BL/6J小鼠由温州医科大学实验动物中心提供，实验动物许可证号:SYXK(浙)2015-0009。小鼠置于温州医科大学实验动物中心SPF级实验动物房进行饲养及实验。室内温度控制在20～25 ℃，湿度控制在40%～70%。

    1.1.2 实验材料:LPS(L9143)购自美国Sigma公司；外源性GPC3(10088-H08H)购自北京Sino Biological公司；SYBR Green Real-time PCR Master Mix-Plus购自日本TAKARA公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒购自美国Thermo公司；GPC3 ELISA试剂盒(EM1084)购自美国Fine Test公司；TNF-α ELISA试剂盒(MTA00B)购自美国Rffamp;D Systems公司；Anti-Glypican3 抗体(ab66596)、Anti-EpCAM抗体(ab71916)购自英国Abcam公司 ......