吕敏，蔡祖仁，陈肖鸣

    (温州医科大学附属第一医院 小儿外科，浙江 温州 325015)

    人类婆罗双树样基因(SALL4)是spalt样(SALL)基因家族(SALL1～4)的成员之一，最初克隆是基于其DNA序列与果蝇同源基因spalt(sal)1，2，3同源，主要参与胚胎的发育[1]。SALL4是一种锌指结构蛋白转录因子，表达于细胞核内，在维持胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)的多能性和自我更新方面起着至关重要的作用[2]。出生后，SALL4的表达下调，在大多数成年组织中缺失。然而大量研究发现，SALL4在恶性肿瘤却恢复表达，SALL4的异常表达通过维持肿瘤干细胞的特性，促进肿瘤增殖、侵袭和转移[3]。自从SALL4首次作为癌基因在白血病中被发现后，SALL4的功能已经在各种类型的癌症中得到了研究[4]。目前在肺癌、乳腺癌、胃癌和结直肠癌细胞中，SALL4已经被证明可以调节细胞活力、凋亡和致瘤性[5-8]。到目前为止，SALL4在儿童睾丸卵黄囊瘤细胞中的作用鲜见报道。因此，本研究通过分析干扰SALL4的表达对儿童睾丸卵黄囊瘤细胞体外增殖、凋亡的影响，进一步明确SALL4与儿童睾丸卵黄囊瘤的关系。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 载体：成品pGPU6/GFP/Neo-SALL4 shRNA干扰载体购于上海吉玛生物公司，包含针对951干扰位点的1条特异性干扰序列(5’-GACCGUUCCAGUGU AAGAUTT-3’)和1条阴性干扰序列(5’-GTTCTCCGAACGT GTCACGT-3’)[9]。

    1.1.2 细胞：利用原代组织培养技术对手术切除的1例儿童睾丸卵黄囊瘤标本进行原代培养，通过连续培养，初步建立起卵黄囊瘤细胞系，并对其生物学进行鉴定[10-11]。

    1.1.3 主要试剂：RNA抽提Trizol、Opti-MEM I低血清培养基均购于美国Invitrogen公司 ......