邵锦根，杨江，陈浩浩，陶红苗，李旭升

    (1.金华市人民医院 神经内科，浙江 金华 321000；2.金华职业技术学院 医学院，浙江 金华 321017)

    缺血性脑卒中已成为严重危害我国居民生命健康的主要疾病之一[1]。研究发现，自噬是溶酶体介导的对体内受损细胞器及大分子物质进行降解的过程，自噬被过度激活后会导致细胞程序性死亡，与脑卒中的病理机制关系密切[2-3]。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)信号通路在自噬中发挥重要的调节作用[4]。海马是大脑中对缺血缺氧损伤极敏感的区域[5]。本研究用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，探讨脑缺血再灌注不同时间对大鼠海马神经元自噬及PI3K/mTOR通路的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：健康雄性SD大鼠72只，体质量180～250 g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，生产许可证号：SCXK(沪)2013-0005，动物合格证号0267780。

    1.1.2 实验试剂和仪器：栓线2634-A4型(北京沙东生物有限公司)；兔抗大鼠Beclin-1多克隆抗体(英国Abcam公司)；兔抗大鼠LC3 II多克隆抗体(英国Abcam公司)；p-PI3K、p-Akt及p-mTOR抗体(美国Santa Cruz公司)；FITC标记山羊抗兔IgG(北京中杉金桥科技有限公司)；BCA试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；PVDF膜0.45 μm(美国Santa Cruz公司)；ECL化学发光试剂盒(美国Pierce Biotechnology公司)；Nikon摄影生物光学显微镜(日本Nikon公司)；Tecnai G2 Spirit Bio TWIN透射电镜(美国FEI公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组和模型制备：参照文献[6]采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。大鼠适应性饲养7 d后 ......