程水兵，郭洋洋，朱恒悦，肖言一，郑士樟，戚如意，周俊雷，杨梅，白永恒

    (温州医科大学附属第一医院，浙江温州325015，1.创伤外科；2.浙江省胰腺肝脏危重性疾病诊治新技术研究重点实验室；3.重症医学科)

    肾间质纤维化是肾脏损伤逐步进展的结果，同时也是造成肾脏功能减退不可逆的原因之一。典型的肾纤维化发生机制为各种原因(缺血缺氧、氧化应激等)引起转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)等促纤维化因子的过度产生和释放，诱导α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)阳性的肌成纤维细胞活化和积聚，最终导致大量的细胞外基质(如I型和III型胶原)成分在肾间质沉积所致[1]。然而，目前尚不十分清楚肾损伤过程中促纤维化因子如何被诱导产生，进而活化肌成纤维细胞。前期研究显示，氧化应激重要的调节分子—核因子E2 相关因子(nuclearfactorerythroid-2relatedfactor2，Nrf2)可能参与肾纤维化进程[2-3]。Nrf2 可以通过抗氧化和抑制炎症反应，从而实现减轻肾损伤，保护肾小管间质纤维化作用[4]。本研究通过体内应用Nrf2 基因敲除小鼠构建单侧输尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，UUO)动物模型，观察敲除Nrf2对肾肌成纤维细胞产生和间质纤维化的作用，及敲除Nrf2对TGF-β1分泌水平的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料 Nrf2(又称Nfe212)基因敲除小鼠(B6.129X1-Nfe212tm1ywk/J)购自南京大学南京生物医药研究院，动物许可证号：SCXK(苏)2015-0001。野生型B6小鼠(C57BL/6)购自温州医科大学实验动物中心，动物许可证号：SYXK(浙)2019-0009。PAS染色试剂盒购自上海太阳生物技术公司；Masson试剂盒购自北京Solarbio公司；免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥公司；兔抗α-SMA抗体(美国CST公司)；兔抗TGF-β1 和III型胶原抗体(美国Bioworld公司)；TRIzol试剂，购自美国Invitrogen公司；RNA反转录试剂盒，购自日本Toyobo公司；AU5800全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特公司)；MyCycler梯度PCR仪(美国Bio-Rod公司)；7500Fast定量PCR仪(美国AppliedBiosystens公司)；VarioskanFlash全波长多功能扫描仪(美国ThermoScientific公司)；DM4000BLED荧光正置显微镜(德国Leica公司) ......