IL-27通过STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺炎
抗体,1材料和方法,2结果,3讨论
巫霞,任妍,巫慧敏(电子科技大学医学院附属妇女儿童医院成都市妇女儿童中心医院保健部,四川成都611731)
急性肺炎是一种常见的呼吸系统疾病,其发病机制复杂,具有发病迅速、发展速度快、不易治疗等特点,严重者可诱发心血管系统疾病,甚至危及生命[1]。急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)是由多种原因引发的肺组织损伤,主要以肺组织炎症、氧化损伤、细胞凋亡等为病理特点。ALI是由全身炎症反应所导致的综合征,死亡率高达40%以上[2-3]。IL-27是近年发现的IL-12家族新成员,目前已经证明其在机体内具有双向免疫调节作用,既能促进某些疾病的发生、发展,又能抑制某些疾病的进展[4]。STAT3是在炎症和癌症中被激活的STAT蛋白家族的关键成员,其通过磷酸化从细胞质穿梭到核而被激活[5]。有研究发现,IL-27 可抑制博来霉素诱导肺纤维化的形成,提高小鼠的生存率[6]。然而,目前有关IL-27对脂多糖诱导的小鼠急性肺炎的影响研究甚少,因此,本研究探讨IL-27调控STAT3信号通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺炎中的作用及机制。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物:SPF级雄性小鼠共32只,6~8周,体质量18~22g,购自中国科学院昆明动物研究所,动物许可证号:SYXK(滇)2017-0009。
1.1.2 实验试剂:LPS(美国Sigma公司),IL-27重组蛋白注射剂、IL-27 蛋白重组抗体注射剂(美国Ebioscience公司),TRIzolReagent(美国Invitrogen公司),STAT3、SOCS3、GAPDH普通PCR上下游引物(上海生工公司),SYBRGreenPCRMasterMix(大连TaKaRa公司),RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit(美国ThermoScientific公司),RIPA裂解液(上海申能博彩生物科技有限公司),BCA蛋白浓度测定试剂盒(美国Thermo公司),STAT3兔抗鼠单抗、p-STAT3兔抗鼠单抗、SOCS3兔抗鼠单抗、TNF-α兔多克隆抗体、IL-1β兔多克隆抗体(美国Abcam公司),HRP标记山羊抗兔IgG(美国SantaCruzs公司),小鼠TNF-α、IL-1β、IL-10 和TGF-β1ELISA试剂盒(深圳欣博盛生物科技有限公司);其余试剂均为国产分析纯。
1.1.3 主要仪器:实时荧光定量PCR仪、电泳仪和转膜仪(美国Bio-Rad公司) ......
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