王建英，李芳红，李花琼，王荣华，王辰飞，赵子建，

    (1.温州医科大学 眼视光学院 生物医学工程学院，浙江 温州 325035；2.广东工业大学 生物医药学院，广东 广州 510006)

    外周神经损伤会导致感觉和运动功能的永久性损害和神经性疼痛，使患者的生活质量下降，给患者和社会带来巨大的经济负担[1-2]。现有的神经移植物存在来源有限、疾病传播、免疫排斥等问题。目前，因异种(猪)神经与人神经有着极其相似的解剖结构，为再生轴突提供指导和支持，是一种潜在的神经移植物[3]，异种脱细胞神经基质已成为用于修复较长神经缺损的移植物研究热点。本研究以α-1，3-半乳糖苷转移酶基因敲除(α-1，3-galactoside transferase gene knockout，GTKO)猪坐骨神经为实验原料，采用自主设计的低渗溶液、胰蛋白酶、低浓度去垢剂及核酸酶组合的四联脱细胞方案，制备低免疫原性异种脱细胞神经基质，检验脱细胞效果并尝试建立一套完整的神经脱细胞方案，探索低免疫原性脱细胞神经基质用于修复长距离外周神经缺损的可行性。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂：PBS、枸橼酸盐修复液、DAB显色试剂盒(ZLI-9001)、兔SP试剂盒(SP-9001)、小鼠SP试剂盒(SP-9002)购自北京中杉金桥生物技术有限公司；SDS、2.5%戊二醛购自上海阿拉丁公司；胰蛋白酶、醋酸异戊酯购自上海麦克林公司。DNA酶、RNA酶为美国Sigma公司产品。HE染色试剂盒购自上海生工生物工程股份有限公司。Triton-X100、DAPI染液、天狼猩红染液购自北京索莱宝科技有限公司。胶原检测试剂盒SircolTMsoluble collagen assay(S1000)购自英国Biocolor公司。抗I型胶原抗体(ab34710)、抗层黏连蛋白抗体(ab11575)、抗纤连蛋白抗体(ab6328)购自英国Abcam公司。抗agal抗体(I21412)、DNA提取试剂盒Residual DNA Sample Preparation Kit(4413686)、DNA检测试剂盒Quant-iTTMPicoGreen dsDNA Reagent and Kits(P11496)购自美国Thermo公司。小鼠成纤维细胞系(L929)购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

    1.1.2 主要仪器：Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司)，DM 500型光学显微镜、DM 2500 LED型正置荧光显微镜(德国Leica公司) ......