陈伟伟，王德选，沈猛，庄捷秋，蔡晖

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院，浙江 温州 325027，1.肾内科；2.儿童肾内科)

    急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是一种临床常见危重病，由多种病因造成肾功能在短期内急性减退[1]。由不同病因(如缺血、炎症、毒素等)导致的急性肾小管坏死(acute tubular necrosis，ATN)是最常见的AKI之一。国内外对常见ATN演变方向的干预研究还处于探索阶段[2]。因此在AKI后至纤维化的过程中找到新的治疗靶点显得尤为重要。

    近年来，针对各类microRNAs在肾脏疾病中的表达谱研究很多，许多microRNAs被证明与AKI密切相关[3]。在AKI中，肾小管上皮细胞会过度表达miR-34a，参与调控肾纤维化和肾损伤[4]。G蛋白途径抑制因子2(G-protein pathway suppressor 2，GPS2)是G蛋白-MAPK途径的调节蛋白之一，它参与细胞骨架构建、DNA修复、炎症反应等体内多种生理病理过程。本课题组在动物实验中发现上述指标在肾缺血再灌注损伤中均出现显著的变化，但两者是否存在关联，有无存在通路蛋白的变化，以及干预后是否影响AKI后进入纤维化的进程尚无定论，为此本研究进行深入探索。

    1 材料和方法

    1.1 材料 健康成年雄性SD大鼠30只，12周龄，体质量250～300 g，无固定病原级，由北京维通利华实验动物技术有限公司(浙江嘉兴平湖基地)提供，饲养于温州医科大学实验动物中心，常规饲料和自来水按时无限制供应，动物许可证号：SCXK(浙)2018-0001。TNF-α、TGF-β ELISA试剂盒及引物由上海博蕴有限公司提供；HEK 293T细胞株由中华细胞库提供；miR-34a inhibitor、NC inhibitor、转染试剂均购自广州锐博公司；TB Green?Premix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)和PrimeScriptTMRT Master Mix(Perfect Real Time)购自大连Takara公司；GPS2等兔多克隆抗体来自美国Abcam公司；p-SPAK/JNK、 t-JNK、Beta-Actin等多克隆兔抗为美国Cell Signal Technology产品；二抗来自美国Jackson ImmunoResearch公司。其余试剂均为市售分析纯。

    1.2 动物实验

    1.2.1 动物分组与模型构建：30只SD大鼠喂养普通饲料适应1周后 ......