向银洲，李雪军，邹玉华，周华军

    (台州市第一人民医院 耳鼻咽喉科，浙江 台州 318020)

    铁是人体生命活动中不可或缺的重要元素，参与细胞呼吸、DNA合成和细胞周期代谢、细胞排毒等[1]。铁离子在氧化还原状态之间转换，产生活性氧物质，不仅损害脂质和蛋白质，还导致氧化损伤DNA[2-4]。因此，铁是细胞生理功能必不可少的物质，同时也存在潜在的毒性。铁能够通过促进形成自由基而使肿瘤的发生加速，也可以作为营养元素促进肿瘤细胞生长增殖，提示铁及铁代谢途径可能成为肿瘤治疗的新靶点。左旋含羞草碱是一种植物氨基酸，研究发现其与胸腺嘧啶的结构具有高度相似性，能够与腺嘌呤在复制点形成氢键，二者具有竞争关系[5]。左旋含羞草碱对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用，诱导肿瘤细胞发生凋亡，并通过螯合铁离子阻断癌细胞周期进程，对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞的生长具有抑制作用，而对正常肝细胞的凋亡几乎没有影响[6-7]。本研究通过观察铁与左旋含羞草碱对咽鳞状细胞癌FaDu细胞凋亡的影响，以及DNA损伤相关蛋白在凋亡过程中的变化，探讨左旋含羞草碱促进咽鳞状细胞癌细胞凋亡的可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料 左旋含羞草碱购于美国Sigma公司；人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株由武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科研究所提供；p-ATM鼠抗人单克隆抗体购于美国Cell Signaling Technology公司；p-ATR鼠抗人单克隆抗体、p-mTOR鼠抗人单克隆抗体购于上海圣克鲁斯生物技术有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞形态学观察：人咽鳞状细胞癌FaDu细胞配制成密度为105个/mL的单细胞悬液，每孔0.5 mL， 均匀加入到6孔板中，添加适量RPMI 1640培养液，置含5% CO2、37 ℃、饱和湿度条件下的恒温培养箱中孵育过夜，次日取出放在倒置显微镜下观察细胞贴壁后，每孔分别加入终浓度为0、100、200、 400 μmol/L的左旋含羞草碱培养液，继续在培养箱中培养24 h、48 h后，取出放在倒置显微镜下观察细胞的生长状况。

    1.2.2 流式细胞仪检测FaDu细胞的凋亡：选择枸橼酸铁铵的实验浓度分别为0、100、500、 1 000 μmol/L，分别加入FaDu细胞培养基中培养48 h后收集细胞。加入-20 ℃预冷70%乙醇固定细胞30 min，放进4 ℃冰箱冷藏过夜。次日取出细胞，倾去乙醇，PBS洗涤细胞3次，加入100 μmol/L 的RNA酶200 μL消化细胞，37 ℃恒温水浴箱水浴 30 min ......