毛卫波，朱忆凌，严礼平，周佳慧，黄渊，陈国荣

    (1.温州医科大学附属第五医院 丽水市中心医院 病理科，浙江 丽水 323000；2.温州医科大学附属第一医院 病理科，浙江 温州 325015)

    大部分肺癌患者在诊断时已属于中晚期，1年生存率极低，且发病率逐年上升[1]。目前临床上治疗肺癌的方式主要为化疗、放疗和手术治疗，但化疗放疗的不良反应较为严重，手术治疗也只适用于肺癌早期患者，因此筛选出不良反应小，抗癌效应强的药物是当前研究的重点。紫杉醇可从短叶紫衫树皮中提取，对Leweis肺癌细胞的生长有显著的抑制作用[2]。有研究表明，紫杉醇抗血管生成能力较强，能显著抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表达，进而间接抑制肿瘤细胞血管的形成[3]。但紫杉醇本身具有一定的细胞毒性，因此，寻找能提高紫杉醇疗效的抗肿瘤药物是当前治疗肺癌的重要方向。贝伐单抗作为一种重组的人源化单克隆抗体，也能与VEGF结合并阻断其生物活性，从而有效地抑制肿瘤血管生成[4-5]，本研究拟分析两者结合应用的抗肿瘤效果是否能优于单味药。S100钙结合蛋白A4(S100 calcium binding protein A4，S100A4)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-9蛋白都参与了肿瘤细胞远处侵袭转移的过程，它们表达水平的变化对于监测肿瘤的发展具有指导意义。本研究通过对肿瘤细胞VEGF和相关蛋白表达的变化来阐述贝伐单抗结合紫杉醇的抗癌效果。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞：鼠源性Leweis肺癌瘤株，由国家实验细胞资源共享平台提供。

    1.1.2 实验动物：50只SPF级健康C57BL/6小鼠，6～8周龄，体质量20～25 g，由温州医科大学实验动物中心提供，动物许可证：SCXK(浙)2016-0010。

    1.1.3 药品与主要试剂：紫杉醇，规格：30 mg/支，国药准字H20053837(合肥大东方药业有限责任公司)；贝伐单抗，规格：100 mg/支，批号：B6003B02(上海罗氏制药有限公司)；IL-2、IL-6、TNF-α和VEGF的ELISA试剂盒，均购自南京建成生物有限公司；S100A4和MMP-9的ELISA试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司；S100A4和MMP-9试剂盒购于上海森雄科技实业有限公司。

    1.1.4 主要仪器：7600全自动生化分析仪(日本日立公司)、3K15超低温离心机(德国Sigma公司)、酶标仪(美国博腾仪器公司)、 CytoFLEX流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司) ......