冯雨露，周乐斌，2，薛向阳，梅劲，3

    (1.温州医科大学 基础医学院 解剖教研室，浙江 温州 325035；2.乐清市人民医院 急诊科，浙江 温州 325600；3.宁波市第一医院 科研中心，浙江 宁波 315000)

    随着基于以肝、心、肺、肾和神经[1-5]等重要器官的去细胞器官为支架在体外重建获得阶段性进展，去细胞皮瓣也逐渐吸引修复重建外科领域 研究者们的注意[6]。然而，皮瓣为不均质组织，常规去细胞的过程存在耗时长、流程复杂、条件苛刻等缺点，仅在制备阶段就遇到了比实质器官更大的挑战。本研究的目的是建立一个简便可靠的去细胞方法来制备更具灵活性及临床适用性的去细胞皮瓣。

    1 材料和方法

    1.1 去细胞皮瓣支架的制备 本研究尝试了一种制作去细胞皮瓣的新方案，利用磁力搅拌器产生的不均匀力场来对冲非均质的皮瓣组织，以尽量保持皮瓣各组织层的完整性。取健康成年SD大鼠[温州医科大学实验动物中心，许可证号：SYXK(浙)2019-0009；雌雄各10只，体质量300～320 g]，5%水合氯醛麻醉，沿腹正中线从下至上切开，对称向背侧剪开，保留3 cm×4 cm大小的皮瓣(图1A方框处示意为取材部位)，暴露股动静脉。进行股动脉置管(24号留置针)，结扎小动脉分支并剪开股静脉后，注射0.05%的肝素生理盐水约20 mL，至肉眼观察到小血管变白。取下去血后的皮瓣，四角束缚于平皿中，表皮层朝向磁珠。平皿内含有0.05%肝素钠生理盐水，开启磁力搅拌器低档旋转。然后依次灌注并震荡0.05%肝素钠溶液0.5 h，1% Triton 1～2 h，0.08% SDS 10～12 h，去离子水12 h。

    1.2 去细胞皮瓣支架检测

    1.2.1 HE及DAPI染色：将皮瓣用OCT包埋后，切成7 μm厚的冰冻切片。0.02% PBS冲洗3次 ......