廖鑫，黄义星

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 骨科，浙江 温州 325027)

    内植入物感染是骨科的严重并发症之一，给患者和社会带来了严重的负担。据报道，在美国每年因植入物感染导致死亡的人数高达5.5万，用于治疗植入物感染的费用超过一千万美元[1]。传统的临床治疗方法为全身应用抗生素。全身用药时，可能会因病灶处血液循环障碍和瘢痕组织的影响导致患处的抗生素浓度无法达到有效水平，从而影响抗感染效果，还会带来严重的全身不良反应。而且，细菌会产生表型改变和代谢，从而对抗生素产生抵抗。本研究采用层层自组装的技术制备(HA/CHIVan)5多层膜结构，用于预防骨科内植入物感染的发生。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验材料和试剂：透明质酸(hyaluronic acid，HA)购自济南福瑞达生物化工有限公司；壳聚糖(chitosan，CHI)购自上海阿拉丁工业公司；万古霉素(Vancomycin，Van)、LB肉汤购自大连美伦生物技术有限公司；苏木素伊红染色液、PBS缓冲液、硅片、无水乙醇、聚乙烯亚胺(polyethyleneimine，PEI)购自上海碧云天生物技术有限公司；血平板购自广州环凯微生物科技有限公司；24孔板细胞爬片购自上海联硕生物科技有限公司；金黄色葡萄球菌、大肠杆菌购自上海艾研生物科技有限公司；Live/Dead试剂盒购自美国Thermo公司；SD大鼠购自温州医科大学实验动物中心，动物许可证号：SYXK(浙)2019-0009；克氏针购自上海开为医药科技有限公司；EDTA脱钙液购自北京索莱宝生物科技有限公司。

    1.1.2 实验仪器：zeta电位仪购自英国马尔文仪器有限公司；SW-CJ医用型超净工作台、孵箱、倒置荧光显微镜购自上海跃进医疗器械公司；扫描电镜(SEM)购自天美(中国)科学仪器有限公司；医用诊断X光机购自北京普朗新技术有限公司；小动物活体microCT影像系统购自上海珀金埃尔默企业管理有限公司；硬组织切片机购自西安蓝茗医疗科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 多层膜的制备：将PEI溶解在去离子水中，并搅拌过夜至2 mg/mL的浓度。制备浓度为0.005 mol/L 的醋酸溶液，并且将HA溶解于上述溶液中至终浓度为1 mg/mL。用相同的方法制备相同浓度的CHI溶液。然后，将Van溶解在上述CHI溶液中，搅拌过夜至终浓度为1 mg/mL(CHI-Van)。将基材(硅片、24孔板玻璃片、克氏针)放入250 mL烧杯中并加入100 mL无水乙醇 ......