陈琛斌，黄群佳，谢旺凯，徐剑峰，沈贤，薛向阳，赵志光

    (1.温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 胃肠外科，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 病理科，浙江 温州 325027；3.温州医科大学 微生物学与免疫学教研室 分子病 毒与免疫研究所，浙江 温州 325035)

    胃癌是全球高发病率的五大恶性肿瘤之一，也是造成中国癌症相关死亡的第二大常见原因[1]。死亡结构域相关蛋白(death domain-associated protein，DAXX)最初被认为是促凋亡蛋白[2]，可与Fas受体的死亡结构域特异性结合[3]。我们前期的研究[4]发现，DAXX表达量的增加与胃黏膜的恶性表型相关，且在胃癌中存在较高的核/浆比值 (nucleus/cytoplasm ratio，NCR)。有研究显示小泛素化修饰(small ubiquitin-like modification， SUMO)对DAXX的亚细胞定位及功能的调节具有重要意义[5]。但是，在胃癌中关于SUMO化修饰改变DAXX的核-浆定位，进而影响胃癌恶性表型的相关研究，仍未见明确报道。本研究旨在比较DAXX在胃癌组织中的表达和亚细胞定位，及其对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响，并探讨SUMO影响DAXX的细胞核-浆定位的机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株和质粒：人胃癌细胞AGS、BGC-823、MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃黏膜细胞系GES-1购自中国科学院细胞库/干细胞库。pcDNA3.1-DAXX-HA重组质粒由本实验室构建并长期保存于 -80 ℃冰箱，质粒大量抽提试剂盒购自美国Omega公司。

    1.1.2 主要试剂：人脂质体LipofectamineTM2000和TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；FBS、DMEM培养基购于美国Gibco公司，Western blot及细胞裂解液试剂盒、ECL化学发光试剂盒以及PBS购自上海碧云天生物研究所，RealMaster Mix试剂盒、ReverTra Ace反转录试剂盒购自日本Toyobo公司，SYBR Green PCR Master Mix、反转录试剂盒购于大连Takara公司，细胞核-浆分离试剂盒购自美国赛默飞世尔科技公司。HA抗体、SUMO-2/3抗体、α-tubulin抗体和Lamin-A/C抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；GAPDH抗体购自杭州贤至生物科技有限公司；FITC标记的羊抗兔抗体购自杭州联科生物技术股份有限公司 ......