金颖莉，夏宣平，曹曙光，林道泼，胡定元，夏盛隆，蒋益

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 消化内科，浙江 温州 325027)

    肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand，TRAIL)属于TNF超家族成员之一，与功能性受体结合后，可激活天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)级联反应，产生凋亡信号，选择性诱导异常转化的细胞发生凋亡，而对正常细胞无影响[1-3]。在人体中，TRAIL功能性受体包括TRAIL-R1和TRAIL-R2，又称死亡受体(death receptor，DR)4和DR5，而小鼠体内仅有一种TRAIL功能性受体，即TRAIL-R，与人类DR5高度同源[4]。TRAIL-R广泛表达于各种免疫细胞上，通过调控这些免疫细胞的增殖、活化及凋亡，在维持免疫稳态中发挥重要作用[5-8]。炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一类慢性非特异性肠道炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。IBD的病因尚不明确，但免疫因素在IBD发病中起着关键作用[9]。KOBAYASHI等[10]报道，Th17细胞数目和活性与IBD患者肠道炎症程度呈正相关。我们的前期研究表明TRAIL(rs1131568、rs1131579、rs1131580)，DR4(rs20575、rs13278062)和DR5(rs1047266)基因多态性与汉族人群IBD的易感性密切相关[11-12]。在此基础上，本研究进一步探讨TRAIL-R基因敲除(TRAIL-R-/-)对小鼠结肠炎及Th17细胞凋亡的影响，为深入揭示TRAIL/TRAIL-R信号通路影响IBD的潜在机制提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂：DSS(相对分子质量36～50 kDa)购自美国MP Biomedicals公司，小鼠外周血淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物公司，RNA提取试剂盒购自德国Qiagen公司，PrimeScript反转录酶购自日本TaKaRa公司，iTaqTMUniversal SYBR?Green Supermix购自美国Bio-Rad公司，胎牛血清购自美国Sigma公司，ROR-γt和IL-17A ELISA试剂盒、Caspase酶活性检测试剂盒均购自杭州联科生物公司。兔抗小鼠GAPDH抗体购自北京Affinity公司，兔抗小鼠IL-17A抗体购自英国Abcam公司；大鼠抗小鼠CD4抗体、大鼠抗小鼠CD4-FITC、大鼠抗小鼠IL-17A-PE及Fix & Perm试剂盒购自美国Biolegend公司；山羊抗大鼠Alexa Fluor 594荧光抗体和山羊抗兔Alexa Fluor 647荧光抗体购自美国Jackson公司 ......