杨再兴，梁艳，刘东红，张振成，罗婉婉，毛盼璎

    1.台州市第一人民医院 检验科，浙江 台州 318020；2.上海长征医院 实验诊断科，上海 200003

    原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis，PBC)是一种以肝内胆管上皮细胞(intrahepatic biliary epithelial，IBEC)炎症性损伤为主要表现的慢性自身免疫性胆汁淤积性肝病，最终会缓慢进展为肝硬化、肝癌。PBC病因不 清，早期症状隐匿，患者出现症状至医院就诊时往往已出现明显肝纤维化甚至肝硬化，但PBC由炎症向纤维化发展的机制至今尚未完全阐明。本实验室和其他国内外研究均发现，PBC患者的IBEC存在上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition， EMT)现象，这种转化可能是PBC由炎症向纤维化过渡的一个重要机制[1-3]。

    低氧是公认的各种肝纤维化疾病肝组织中广泛存在的现象，在PBC患者肝组织门管区也存在低氧情况[4]，但低氧是否与IBEC发生EMT有关，国内外尚未见相关研究报道。因此，本研究拟深入探讨低氧是否可以诱导人IBEC(human IBEC，HIBEC)发生EMT，并阐释其可能分子机制。

    1 材料和方法

    1.1 细胞及主要试剂、耗材 HIBEC购自北京北纳创联生物技术研究院；1640培养基、胎牛血清和胰蛋白酶购自美国Gibco公司；10 cm细胞培养皿和6孔细胞培养板购自美国Fisher Scientific公司；TGF-β1 ELISA检测试剂盒购自武汉优尔生公司；高纯总RNA快速提取试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司；反转录试剂盒HiScript-II Q RT SuperMix、 ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix和Exfect?2000 转染试剂购自南京诺唯赞生物科技公司；CFX connect Real-Time PCR System定量PCR仪及其配套使用分析软件为美国Bio-Rad公司产品；polycarbonate membranes chambers为美国Corning公司产品；TGF-β1抑制剂(LY364947)购自美国Selleck公司；E-钙黏蛋白(E-cadherin)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α ......