朱融和，孙媛媛，王凯，王楸

    温州医科大学附属第一医院 儿科，浙江 温州 325015

    新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE)是由于各种围生期因素引起的脑缺氧或缺血而形成的常见脑损伤，是儿童神经系统损伤引起的新生儿期的重要疾病之一，探索HIE的发病机制是寻求该病有效治疗方案的根本途径[1]。炎症反应和细胞凋亡在HIE发病过程中起重要的作用，细胞死亡可释放出细胞外组蛋白[2]。在体外研究中，细胞外组蛋白可损伤内皮细胞[3]、刺激细胞因子的释放[4]，并能诱导嗜中性粒细胞细胞外诱捕网的形成和髓过氧化物酶的释放。因此，若能将细胞外组蛋白阻断，中和或降解其细胞毒性作用，对减少HIE的发生具有重要的临床意义。本研究通过建立7日龄新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)模型，外源性给予抗组蛋白中和抗体，观察其对HIBD是否有保护作用，并且研究细胞外组蛋白是否通过凋亡途径参与HIBD的发生与进展。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物及分组：7日龄新生SD大鼠54只，体质量12～15 g，雌雄不限，由温州医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK(浙)2015-0009。利用随机数余数分组法将其分成3组，分别 为：假手术组、HIBD组和治疗组，每组18只。造模后各组又随机分为3个亚组：6 h组、24 h组和72 h组。每个亚组6只。

    1.1.2 主要试剂：8%氧氮混合气体购自广州气体厂；检测细胞外组蛋白ELISA试剂盒(Cell Death Detection Kit)购自德国Roche公司；特异性组蛋白H4中和抗体购自南京金斯瑞生物科技有限公司；兔抗鼠anti-cleaved casepase-3 抗体，antiβ-actin抗体及山羊抗兔二抗购自美国Abcam公司，TUNEL染色试剂盒、尼氏(Nissl)染色液及Western blot相关试剂均购自南通碧云天生物技术研究所，其他试剂为国产分析纯 ......