项鲁丹，孙焕坤，吴仟，汪伟，黄智慧，于欣

    1.温州医科大学 精神医学学院，浙江 温州 325035；2.杭州师范大学 药学院，浙江 杭州 311121

    SARM1(sterile alpha and TIR motif containing 1)蛋白是TLR(Toll-like receptor)5个接头蛋白中的一个[1-2]，由MINK等[3]于2001年首次报道。SARM1蛋白高表达于神经元[4]，在中枢神经系统中发挥着重要作用，是轴突变性的关键因 子[5]，既参与脑内的先天免疫[4]，又调控神经元形态[6]和凋亡[7]。除此之外，SARM1亦影响神经元的突触反应和突触后蛋白表达水平[8]。因此，SARM1与神经系统的发育和功能密切相关。

    然而既往对于SARM1基因功能的研究均是在RNA干扰(RNAi)或者全身性敲除SARM1基因的基础上完成的。RNAi和全身性敲除不能特异性地在特定细胞中将基因敲除，大大限制了相关基因蛋白在某些特定细胞中作用的研究。为了更精确地研究SARM1在神经细胞中的作用，本研究采用了ES细胞 (embryonic stem cell)打靶方式构建了SARM1基因条件性敲除(conditional knockout，CKO)小鼠，并将其与神经系统特异性的Nestin-Cre小鼠杂交，最终得到SARM1Nestin-CKO小鼠，并探讨SARM1在神经精神系统疾病中的作用。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：SARM1flox/flox小鼠(20～25 g，6～ 8周龄，雌性)和Nestin-Cre工具鼠(20～25 g，6～8周龄，雄性)均由上海南方模式生物科技股份有限公司制备。动物饲养于温州医科大学实验动物中心，动物许可证号：SYXK(浙)2015-0009，本研究获得温州医科大学实验动物伦理委员会批准。

    1.1.2 药物与试剂：PCR引物购自上海生工生物工程有限公司。蛋白裂解液、蛋白酶抑制剂混合物购自美国Sigma公司。脱脂奶粉购自美国BD公司。1 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH=6.8)、1.5 mol/L Tris-HCl(pH=8.8)、30% Acrylamide均购自北京索莱宝有限公司。多聚甲醛购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。兔抗SARM1(ab226930)购自美国Abcam公司，鼠抗β-actin(HC201-01)购自北京全式金生物技术有限公司，鼠抗NeuN(MAB377)购自美国Millipore公司 ......