胡倩，蓝晓珊，林颖欣，陈秀云，丁林潇潇，庞丹梅

    1.佛山市第一人民医院 肿瘤中心，广东 佛山 528000；2.中山大学孙逸仙纪念医院 乳腺医学部，广东 广州 510120

    据报道乳腺癌是全世界女性最常见的恶性肿 瘤[1-2]。表观遗传修饰在乳腺癌的发生发展过程中发挥重要作用[3-4]。外界环境因素如药物、饮食、生活习惯能直接影响表观遗传学修饰，如DNA甲基化、组蛋白乙酰化等[3-5]。肿瘤的发生发展和原癌基因的异常低度甲基化与抑癌基因的异常高度甲基化有关[6]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)也是表观遗传学修饰一种方式[7-8]。本研究采用高通量lncRNA芯片技术和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)筛选受甲基化水平影响的 lncRNA分子，分析其可能对乳腺癌的发生发展所发挥的调控作用。

    1 材料和方法

    1.1 细胞株 采用三株人乳腺癌细胞株BT549、MB231 和BT474 以及人正常永生化乳腺上皮细胞MCF10A。BT549、MB231细胞株的表型为三阴型，而BT474细胞株表型为上皮型。BT549、BT474及MB231细胞培养于10%胎牛血清的DMEM低糖培养基，人正常永生化乳腺上皮细胞株MCF10A培养于含5%马血清、10 μg/mL胰岛素、20 μg/mL表皮生长因子、100 μg/mL霍乱毒素、0.5 μg/mL氢化可的松的DMEM/F12培养基，置于37 ℃、5% CO2恒温细胞培养箱，待细胞培养至80%～90%融合时移去旧培养基，使用1 mL 0.25%胰酶消化传代。根据文献报道及预实验结果，本研究利用上皮型BT474乳腺癌以去甲基化药物5-氮杂胞苷(5’aza-deoxycytidine，sigma)5 μmol/L的处理72 h，每24 h换液，获得乳腺癌细胞去甲基化处理株[9]。细胞株均购置于ATCC细胞保藏中心。

    1.2 乳腺癌组织标本 选取2019年6月佛山市第一人民医院符合病理诊断的20例乳腺癌患者。20例患者均为女性，年龄38～70岁，中位年龄50岁。入选标准：①病理确诊的乳腺浸润性导管癌；②体力评分(performance status，PS)0～2分；③无严重的骨髓功能或肝肾功能异常。本研究经本院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书 ......