郭蕊，宋楠，潘昊，林贤丰，金可可

    1.温州医科大学 基础医学院，浙江 温州 325035；2.浙江大学医学院附属邵逸夫医院 浙江省骨骼肌肉退变与再生修复转化研究重点实验室，浙江 杭州 310000

    大面积骨缺损再生是一个漫长的修复过程，而且面临不能完全修复的风险。自体骨移植是骨缺损修复的金标准，但会造成供体部位骨量下降、感染和长期疼痛等并发症[1]。生物材料骨移植是一种有前景的替代治疗方法。理想的骨移植材料要有生物相容性、可降解性和低免疫原性的特点，还要有促进细胞迁移和血管长入的作用。天然松质骨脱细胞基质(cancellous bone decellular matrix，DCBM)具有疏松多孔的结构，含有丰富的I型胶原(collagen I，Col-I)和骨基质中的生长因子，对骨缺损部位的修复填充、血管长入和成骨细胞募集迁移具有明显的调控作用[2]。不同年龄段干骺端松质骨组织在骨小梁排列、胶原分布和生长因子含量等方面存在差异，因此在促进骨修复方面也有不同的特点。本研究选取幼龄和成年的猪股骨干骺端松质骨，用本课题组自主设计[2]的脱细胞方案去除细胞保留细胞外基质，采用纳米液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)分析两种DCBM的蛋白组成，比较幼年和成年猪DCBM的促骨生长细胞因子和诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)成骨分化能力。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 DCBM的制备：按本课题组的优化配方用相同方案制备幼年(3月龄)和成年(6月龄)DCBM，去细胞效果符合以下标准：①HE和DAPI染色无核残留；②DNA残留量小于50 ng/mg干重；③残留DNA片段小于200 bp[3]。实验分AN组(成年天然松质 骨)、AD组(成年脱细胞松质骨)、YN组(幼年天然松质骨)和YD组(幼年脱细胞松质骨)。

    1.1.2 主要试剂：Masson染色试剂盒和阿利新蓝染色试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司。羟脯氨酸检测试剂盒购自南京凯金生物科技有限公司。Blyscans GAGs测定试剂盒购自英国Carrick Fergus公司。Anti-Col-IA2 antibod y(ab270994)、Anti-BMP2 antibody(ab214821)、Anti-osteocalcin antibody(ab93876)、MMP-13 polyclonal antibody(ab52915)购自英国Abcam公司。兔SP免疫组化试剂盒(SP-9001)购自北京中杉金桥生物技术有限公司 ......