吴存造，陆红，朱恒悦，翁敏，施程浩，林周豪，白永恒

    温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.泌尿外科；2.检验科；3.浙江省胰腺肝脏危重性疾病诊治新技术研究重点实验室

    氧化应激损伤是各种类型肾损伤的重要病理因素，可直接或间接地引起肾皮质固有免疫细胞活化及周围组织、血管中大量炎症细胞的浸润。浸润的炎症细胞又可释放炎症介质，使肾皮质缺氧程度进一步加重，进而引起肾小管损伤、肾缺血和纤维化，形成恶性循环[1]。巨噬细胞是肾氧化应激损伤过程中重要的免疫细胞和炎症细胞，其活化通过释放诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)等物质，诱导局部炎症损伤，参与间质纤维化进程[2]。核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2)是机体重要的抗氧化应激损伤分子[3]。氧化应激损伤时，反应性氧代谢产物(reactive oxygen species，ROS)等可诱导Nrf2解耦联，使之进入细胞核并与抗氧化反应元件(antioxidative response element，ARE)结合，激活下游多种基因的转录，从而发挥其抗氧化活性[4]。然而，Nrf2是否参与肾纤维化过程中的炎症反应及影响巨噬细胞活化尚不十分清楚。本研究以临床上常见的单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction，UUO)诱导肾纤维化模型作为研究对象，通过分析Nrf2基因敲除后，巨噬细胞的活化及其调控机制，以明确抗氧化应激分子Nrf2在肾炎症损伤和纤维化中的作用。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物：Nrf2(Nfe212)基因敲除小鼠(B6.129X1-Nfe212tm1ywk/J)购于南京大学南京生物医药研究院，动物许可证号为SCXK(苏)2015-0001。野生型B6小鼠(C57BL/6)购于温州医科大学实验动物中心，动物许可证号：SYXK(浙)2019-0009。所有实验动物喂养程序严格按照温州医科大学制定的实验动物保护条例执行。

    1.1.2 试剂：PAS染色试剂购于上海碧云天生物公司；Masson试剂盒购于北京Solarbio公司；免疫组织化学试剂盒购于北京中杉金桥公司；抗CD68单克隆抗体购于美国Santa Cruz公司；iNOS试剂盒购于武汉Proteintech公司；干扰素调节因子5(interferon regulatory factor，IRF5)抗体购于美国Proteintech公司；TRIzol试剂购于美国Invitrogen公司；RNA反转录试剂盒购于日本Toyobo公司 ......