王平，孟立平，刘龙斌，彭放

    1.绍兴市人民医院(浙江大学绍兴医院) 心内科，浙江 绍兴 312000；2.绍兴文理学院附属医院(绍兴市立医院) 心内科，浙江 绍兴 312000

    冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease，CHD)是严重危害人类生命健康的一种疾病，经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention，PCI)是目前CHD的主要治疗手段，但是冠脉支架植入术后支架内再狭窄(in-stent restenosis，ISR)一直是心内科介入医师所面临的一个非常棘手的问题。

    血管内皮细胞是一层连续覆盖于整个血管腔表面的扁平细胞，是血管基底膜的重要组成部分，是血管壁与血液间的分界细胞。内皮细胞衬托在血管内壁，具有许多重要的生理功能。完整的内膜可以减少血栓的形成，减少平滑肌细胞的激活从而抑制ISR的形成。最近多项大规模临床研究结果都显示，雷帕霉素洗脱支架相比于其他的药物洗脱支架，其支架内血栓形成的风险增加，有学者怀疑这可能跟雷帕霉素引起内皮细胞损伤有关[4]，并通过基础研究证实雷帕霉素可以影响内皮细胞膜的结构，增加血小板和血栓黏附在内皮细胞上[5]。GUO等[6]研究结果显示雷帕霉素在抑制血管平滑肌细胞增殖的同时，也会抑制血管内皮细胞增殖，甚至引起血管内皮细胞的凋亡，从而破坏支架表面血管内膜形成，增加支架内血栓风险。这些研究结果提示在应用雷帕霉素药物洗脱支架的同时，使用血管内皮细胞保护性药物，可以减少支架内血栓的形成，降低ISR的发生率。

    在本研究中，我们通过随访雷帕霉素支架术后患者，根据复查造影结果确认是否发生ISR，收集患者血浆并提取外泌体，用患者血浆外泌体干预经雷帕霉素诱导的内皮细胞增殖抑制模型，观察循环外泌体对内皮细胞的保护作用及其可能的机制。

    1 材料和方法

    1.1 内皮细胞和主要试剂 本实验中采用的人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC-12细胞)购自上海博湖细胞公司。胎牛血清及RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司；MTT细胞增殖检测试剂盒购自美国Sigama公司；HOXA11-AS引物由上海吉凯生物科技公司合成，pHOXA11-AS及其相应对照物购自上海吉凯生物科技公司；SYBR Green PCR Master Mix试剂购自大连TaKaRa公司；CD63、CD9、PCNA、Ki-67、SOX4抗体均购自美国Sant Cruz公司，Western blot相关试剂购自苏州碧云天生物科技公司 ......