赵晶，李蒙，叶成，戴金峰，范一宏

    浙江中医药大学附属第一医院 消化科，浙江 杭州 310006

    我国胃癌发病率逐年上升，且由于胃癌早期临床症状不明显导致大部分患者确诊时已处于中晚 期[1]。长链非编码RNA(long chain non-coding RNA, lncRNA)在胃癌中异常表达并可能发挥癌基因或抑癌基因作用[2-4]。lncRNA肌联蛋白反义RNA 1(lncRNA titin antisense RNA 1, lncRNA TTNAS1)可促进胃癌的发展[5]，但TTN-AS1在胃癌发生及转移过程中的作用机制尚未完全阐明。靶基因预测显示微小RNA-204-3p(miR-204-3p)与TTN-AS1存在结合位点，研究表明miR-204-3p通过调节乳酸脱氢酶介导的糖酵解抑制膀胱癌细胞的增殖[6]。 但TTN-AS1与miR-204-3p在胃癌发生及转移过程中的作用机制尚未可知。因此，本研究主要探讨TTN-AS1对胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及其与miR-204-3p的关系，旨在探究TTN-AS1在胃癌中的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 临床标本：收集2018年1月至2019年10月于浙江中医药大学附属第一医院接受胃癌根治术治疗的30例癌组织标本及其相应癌旁组织标本(距离病灶组织>5 cm处)，置于液氮中保存，均经病理诊断为胃癌，其中男20例，女10例，年龄52～68(56.4±10.0)岁；TNM分期I期7例，II期5例，III期18例；排除患有其他恶性肿瘤、自身免疫系统疾病以及肝、肾等重要脏器功能障碍的患者。每位患者均知情同意，本研究经本院伦理委员会批准。

    1.1.2 细胞和试剂：人胃癌细胞AGS购自南京科佰生物公司；Lipofectamine2000购自上海润成生物科技有限公司；si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-204-3p购自广州锐博生物公司；TRIzol试剂购自广州国奥生物公司；反转录、qRT-PCR试剂购自美国Thermo Fisher公司；Transwell小室购自上海宇进生物公司；Matrigel基质胶购自上海浩然生物公司；兔抗人MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin抗体购自美国Santa Cruz公司。

    1.2 方法 ......