陈艳艳，李佳，徐自强，夏念格

    温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.神经内科；2.移植科

    糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)是糖尿病最常见的慢性并发症之一，约50%的糖尿病患者深受其害，是糖尿病患者高致残率、高病死率的主要原因[1]。DPN临床表现多种多样，以远端对称性多发性神经病变最常见，引起下肢截肢的风险高达25%，危害极大[2]。糖尿病早期，甚至糖耐量异常阶段即可并发DPN，但早期诊断较困难。虽然高血糖被认为是引起DPN的主要因素，但其具体发病机制尚不明确，目前仍缺乏有效的治疗方法和特异性的药物[3]。DPN的发病机制错综复杂，炎症反应和凋亡是DPN重要的发病机制之一[4]。胰岛移植是目前能完全逆转糖尿病引起的胰岛素分泌障碍和代谢紊乱的唯一方法。本研究通过建立糖尿病大鼠模型并进行胰岛移植，观察胰岛移植对坐骨神经病理改变的影响、大鼠痛敏反应时间的改变，并观察促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达变化及B淋巴细胞瘤2蛋白(B-cell lymphoma-2, BCL-2)/BCL-2相关X蛋白(BCL-2 associated X, BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白表达的变化，探讨其可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 SPF级健康雄性SD大鼠，体质量180～220 g，由温州医科大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK(浙)2020-0001。

    1.2 主要试剂 V型胶原酶和链脲菌素(购自美国Sigma公司)，双硫腙(购自上海三爱思试剂有限公司)，FBS(购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)，Histopaque?-1077、1119溶液(购自美国GE公司)，反转录试剂盒(购自日本Takara公司)，实时定量PCR试剂盒(购自美国Thermo公司)，BCL-2抗体(购自英国Abcam公司)，BAX、caspase3、GAPDH抗体(均购自美国CST公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 胰岛的获取、纯化：取SD大鼠，持续乙醚吸入麻醉，于腹部作V形切口，使胆总管充分暴露，于胆总管入十二指肠处用动脉夹夹住十二指肠的两端；破心处死大鼠后，于胆总管左右肝管分叉处用套管针行胆总管插管；逆行灌注V型胶原酶溶液8 mL (0.8 mg/mL，用D-Hanks液配制)，待胰腺充分膨胀后，剥离放入含10 mL胶原酶的离心管中，于37 ℃ 恒温水浴中充分消化至乳糜状后终止 ......