郑晟超，毛佳斌，何大强

    1.杭州师范大学附属医院 结核科，浙江 杭州 310015；2.浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院 检验科，浙江 杭州 310006

    肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，是全球癌症相关死亡的主要原因[1]。尽管近几十年来肺癌诊断和治疗方面取得了显著进展，但5年生存率仍然低于20%[2]。山奈素是一种天然存在于茶以及许多常见的蔬菜和水果中的类黄酮化合物[3]。研究表明，山奈素在乳腺癌中显示出抗增殖和促凋亡的功效[4]，还可以增强人肺癌A549细胞的化学敏感性[5]。但山奈素在肺癌细胞生物行为中的功能和机制仍未阐明。环状RNA(circular RNA, circRNA)被报道在肺癌的癌变和发展过程中异常表达，并作为重要的调控元件，为肺癌的诊断和预后提供潜在的靶点[6]。先前的研究表明，circ-RPL15作为一种新型致癌驱动因子，促进慢性淋巴细胞性白血病的进展[7]，但circ-RPL15在肺癌进展中的潜在功能尚不清楚。本研究探讨山奈素在肺癌细胞增殖、迁移和凋亡过程中的功能，并结合circ-RPL15进一步阐明其可能的作用方式。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞：肺癌细胞A549购自中国科学院细胞库。

    1.1.2 主要试剂：山奈素(纯度≥98%)购自上海纯优生物科技有限公司；细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8, CCK-8)购自日本Dojindo公司；Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙锭(propidium iodide, PI)细胞凋亡检测试剂盒购自杭州联科生物技术有限公司；裂解-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)抗体购自美国Abcam公司；PrimeScript RT试剂盒购自大连TaKaRa公司；SYBR Green Master Mix购自美国Applied Biosystems公司。

    1.1.3 细胞培养：肺癌细胞在含有10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)的RPMI1640培养基中培养，并保存在37 ℃、5% CO2、饱和湿润恒温培养箱中。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞处理：山奈素以培养基稀释成25、50、75 μg/mL，给药时分别将25、50、75 μg/mL山奈素[4]作用于对数生长期的肺癌细胞48 h，对应山奈素25 μg/mL组、山奈素50 μg/mL组、山奈素75 μg/mL组。同时将正常培养的肺癌细胞设为对照组 ......