王平，孟立平，刘龙斌，彭放

    1.绍兴市人民医院(浙江大学绍兴医院) 心内科，浙江 绍兴 312000；2.绍兴文理学院附属医院(绍兴市立医院) 心内科，浙江 绍兴 312000

    冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)的发病率逐年上升，且发病年龄呈年轻化趋势。近年冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention, PCI)飞速发展，但即便是最新型支架的出现也并未从根本上解决冠状动脉支架内再狭窄(in-stent restenosis, ISR)的问题，在PCI患者中ISR总的发病率仍达3%～20%[1]。

    紫杉醇可以通过抑制细胞有丝分裂和触发细胞凋亡有效阻止细胞的增殖，被广泛应用在肿瘤治疗领域。由于紫杉醇可以抑制平滑肌细胞的增殖，有效抑制ISR的进展，近年来也被应用于冠脉内支架涂层。尽管紫杉醇药物涂层支架被推广使用，临床医师发现ISR的问题仍然存在。PCI术后支架表面快速的内膜化是减少急性和慢性IRS的关键[2]。随着药物涂层支架的不断推广，越来越多的学者注意到药物涂层对内皮细胞的损伤是引起ISR的一个重要因素。过去WANG等[3]的研究结果显示紫杉醇减低血管内皮细胞中血栓调节蛋白的表达，增加了支架术后血栓形成的风险。ZAMORA等[4]的研究发现紫杉醇还可以诱导内皮细胞的自噬，并最终导致内皮细胞的死亡。

    细胞焦亡是近年来发现的伴随炎症反应的一种新型的程序性细胞死亡方式，在形态和病理生理机制方面都区别于凋亡和坏死，是机体一种重要的先天炎症免疫反应，广泛参与到感染性疾病、心血管疾病，以及肿瘤等疾病的发生发展中[5]。在本研究中，我们发现紫杉醇可以导致内皮细胞焦亡，并进一步证实内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)来源的外泌体可以抑制紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡。

    1 材料和方法

    1.1 材料 本实验中采用的人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC-12细胞)购自上海博湖细胞公司。胎牛血清及RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司；钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein-AM)购自杭州浩鑫生物公司；SYBR Green PCR Master Mix试剂购自大连TaKaRa公司；CD34、CD44、CD90、VEGFR2、NLRP-3、IL-18、GSDMD-N抗体均购自美国Abcom公司，蛋白质印迹法(Western blot)相关试剂购自南通碧云天生物科技公司。

    1.2 外泌体的提取与鉴定 ......