丁露，马罗平，孟明星，王磊，姜盛，关智敏，张廷彩，李娜

    1.湖北文理学院 基础医学院，湖北 襄阳 441053；2.温州医科大学 基础医学院，浙江 温州 325035；3.温州医科大学附属第一医院 心胸外科，浙江 温州 325015；4.潍坊高新技术产业开发区人民医院 科教科，山东 潍坊 261000

    心肌梗死作为冠心病中最严重的类型，是人类死亡的主要原因[1]。目前通过再通血管，恢复心脏血流，达到治疗目的。但再通术后往往伴随心肌损伤这一术后病理改变，被称为心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤，严重影响再通后的治疗效果[2-3]。研究表明，心肌I/R会引发氧化应激，导致心肌细胞出现坏死和凋亡，对心肌梗死病死率产生显著影响[4]。因此，干预氧化应激下心肌细胞发生的凋亡是提高心肌梗死治疗效果，改善预后的重要手段。钩藤是我国传统中药，具有预防和治疗心血管疾病的药理作用，毛钩藤碱(hirsutine,HS)作为其主要的生物成分，是一种新型生物碱单体化合物[5]。WU等[6]发现，HS具有保护缺氧诱导的心肌损伤的作用。基于这一研究基础，本研究将探讨HS对H2O2诱导的心肌细胞氧应激损伤的影响及其作用机制，为其成为治疗心肌损伤的化合物提供理论依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物：SPF级SD大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，放置在温州医科大学动物实验中心饲养繁殖，实验动物许可证号：SCXK(浙)2010-0044。

    1.1.2 实验试剂：高糖DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶(美国Gibco公司)，胶原酶(美国Sigma公司)，细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8, CCK-8)购自上海碧云天公司，Fluo-488-Tunel试剂盒购自上海碧云天公司；BrdU购自美国Sigma公司；兔抗大鼠Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3、Caspase 3、核因子E2相关因子-2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)、GAPDH抗体以及辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG均购于美国Cell Signaling Technology公司。

    1.2 方法

    1.2.1 大鼠乳鼠原代心肌细胞的培养：将出生1～ 2 d的大鼠乳鼠浸泡于乙醇消毒后 ......