黄颖，史耀琪，胡佳明，倪新雨，朱华

    温州医科大学附属第一医院 妇科，浙江 温州 325015

    宫颈癌为全世界女性中第四大常见癌症，严重危害着当代女性的健康[1]。宫颈癌的主要致病因素是高危型乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)的感染[2]。虽然商业化应用的HPV疫苗可以预防宫颈癌，但是已感染HPV的患者数量众多，而不发达国家HPV疫苗接种率偏低，因此宫颈癌的发病率仍然高居不下。临床上对宫颈癌的治疗主要依赖手术、放疗、化疗等方法，不良反应较强。

    中药以其天然、不良反应小的独特优势被越来越多地应用到抗肿瘤领域中，部分中药已被美国FDA批准进入临床试验[3]。姜黄素是从姜科植物的根茎中提取的酚类色素，呈橙黄色结晶粉末状，气香特异，味微苦、辛，在传统中医中有很大的药用价值，主治胸胁刺痛，胸痹心痛，痛经经闭，症瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛等疾病。近年来，越来越多的研究发现了姜黄素的抗肿瘤作用，包括抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、抑制肿瘤侵袭和转移等[4-6]。

    本课题组前期预实验结果表明，姜黄素对HPV阳性宫颈癌细胞具有杀伤作用，并且姜黄素可以上调HPV阳性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达水平。研究表明，LncRNA MEG3能够抑制多种癌症的发生发展[7-10]，而且LncRNA MEG3能够抑制miR-21的表达[7，11]。本研究旨在探讨姜黄素杀伤HPV阳性宫颈癌细胞与LncRNA MEG3的上调表达的相关性以及具体的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株、载体与主要试剂：HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞株购自中国科学院细胞库；α-MEM培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素等细胞培养试剂购自美国Gibco公司；姜黄素(纯度>98%)购自上海源叶生物科技有限公司；Lipofectamine 2000、TRIzol购自美国Invitrogen公司；LncRNA MEG3 siRNA委托上海吉玛制药技术有限公司合成；反转录试剂盒、RT-PCR试剂盒及引物的设计和合成委托大连TaKaRa公司完成；CCK-8细胞活性检测试剂盒、Annexin V-PE/7-AAD凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；PTEN单克隆抗体和活化的caspase3 单克隆抗体购自美国Cell Signaling公司；其他常用试剂购自美国Sigma公司 ......