朱玲丽，杨建环，王德选，陈敏广

    温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 儿童肾内科 温州市儿童泌尿生殖系统疾病重点实验室，浙江 温州 325027

    随着新一代利尿剂，即加压素V2受体拮抗剂的问世，水通道蛋白2(aquaporin 2, AQP2)已成为当前的一个研究热点[1]。作为抗利尿激素的主要靶蛋白，AQP2不仅在维持哺乳动物体内水稳态方面起着至关重要的作用，而且在促进肾脏上皮细胞迁移以及维持肾脏结构和功能的完整性方面也起着至关重要的作用，与多囊肾、肾病综合征等多种疾病的发病密切相关[2-3]。目前糖皮质激素(glucocorticoids, GCs)在AQP2调控机制中的作用尚未得到明确[4]，但越来越多的研究已证实GCs对AQP2具有显著的调控作用，有研究显示GCs有抑制AQP2作用[5]，更多的研究结果则提示GCs对AQP2具有上调效应[6-8]，其确切的作用有待进一步明确。目前对GCs调控AQP2的具体机制仍不清楚，针对性的研究很少，有待进一步深入探讨。

    作为一种膜蛋白，目前已知蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)的活化和AQP2 COOH末端的磷酸化是AQP2实现细胞内转运并发挥生物学作用的关键环节[4，9-14]；此外，有研究也证实：在APQ2的调控中，存在除PKA外的其他激酶诱导的磷酸化通路[15]。鉴于GCs与PKA密切相关，二者具有协同作用[16-18]，我们推测在AQP2的调控中，GCs很可能与PKA协同发挥作用，其过程依赖于PKA信号通路。为了进一步明确GCs对AQP2的调控作用及其机制，我们以PKA为参照，观察了GCs的代表药物地塞米松(Dex)对体外培养细胞表达AQP2膜蛋白和总蛋白的直接调控效应。同时通过构建独特的AQP2突变质粒(突变了AQP2 C末端4个公认的磷酸化位点)，阻断PKA信号通路，评估了Dex的上述调控效应对PKA信号通路的依赖程度。

    1 材料和方法

    1.1 材料 DMEM培养基、胎牛血清和非血清减血清培养基、脂质体2000购自美国Invitrogen公司；QIAGEN质粒小量提取试剂盒购自德国QIAGEN公司；Dex、赖氨酸购自美国Sigma公司；TNT偶联网织红细胞裂解液系统、PKA催化亚基购自美国Promega公司；蛋白A珠、EZ-Link磺基-N-羟基琥珀酰亚胺二硫化物-生物素、链霉亲和素-琼脂糖珠购自美国Pierce公司 ......