蒋一玲，余洪金，张宁波，陈承

    杭州师范大学附属萧山医院，浙江 杭州 311201，1.肿瘤内科；2.放射治疗科

    肺癌已成为当今世界恶性肿瘤死亡的首要原因，是一种具有较强侵袭和转移能力的恶性肿 瘤[1]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的发病率约占肺癌的85%，是一种对放疗中度敏感的恶性肿瘤[2]。放疗已逐渐成为NSCLC的有效治疗手段之一，但由于NSCLC患者在治疗的中晚期出现抗辐射作用，放疗的效果并不理想，因此，提高NSCLC患者的放射敏感性是临床亟待解决的重要问题。大蒜素是一种从大蒜鳞茎中提取的含硫化合物的复合体，其对肿瘤细胞有抑制作用[3]。重要的是，大蒜素可显著抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移能力[4]。近期也有研究证实，大蒜素能够增强肺癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)的敏感性[5]。然而，大蒜素对NSCLC细胞放射敏感性的调控作用鲜见报道。本研究拟探讨大蒜素对NSCLC细胞放射敏感性的调控作用以及其分子机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系：NSCLC细胞系A549和正常肺上皮细胞株BEAS-2B购自美国模式培养物集存库(ATCC)细胞库。

    1.1.2 试剂与仪器：本研究中所使用的试剂和仪器及其来源见表1。

    表1 试剂和仪器及来源

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：将A549细胞于含有10%胎牛血清、100 μg/mL链霉素和100 U/mL青霉素的F-12K培养基中培养，培养条件均为37 ℃，5% CO2。随后取对数生长期的A549细胞进行后续实验。

    1.2.2 细胞转染：将处于对数生长期的A549细胞接种于6孔板中，将miR-486-5p inhibitor(I)和阴性对照物(inhibitor control, IC)采用 LipofectamineTM3000试剂按照产品说明书进行转染，转染24 h后用于后续实验。

    1.2.3 MTT检测细胞增殖活力：将处理对数生长期的A549细胞经胰酶消化后，制备单细胞悬液。将A549细胞(5×104个/孔)接种在96孔板中于37 ℃，5% CO2培养箱中培养24 h。更换培养基 ......