项友群，方冠，金亦翔，杨凯，潘贻飞

    温州医科大学附属第一医院结直肠肛门外科，浙江 温州 325015

    结直肠癌(colorectalcancer, CRC)是世界范围内最常见的消化系统肿瘤之一[1]。2015 年我国CRC新发病例近38万例，病死近19万例，发病率和病死例数均居世界首位[2]。CRC的进展通常伴随着癌基因和抑癌基因的突变，表达量的变化以及表观遗传学变化等[3-4]。虽然对CRC进展过程中基因水平的表达调控已有了广泛的研究，但是CRC在分子水平的发生发展机制仍有待阐明。明确CRC增殖、迁移和侵袭的相关分子与相关信号通路，对于CRC的诊断与治疗具有重要的意义。G蛋白信号调节因子-13(regulatorofGproteinsignaling13, RGS13)基因位于人类1号染色体长臂3区1带，编码19.1kDa的蛋白质。RGS13是Gαi和Gαo的GTPase激活蛋白，使结合的GTP转变为GDP，从而调节G蛋白的活性来抑制G蛋白的信号转导[5-6]。作为一个与细胞信号通路密切相关的因子，其在肿瘤发生发展中的作用尚不完全清楚。本研究通过TCGA数据库发现RGS13在人类CRC组织中低表达，并在CRC临床组织样本和细胞系中进行验证，探究了其在CRC细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其可能的下游机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞：结直肠正常细胞系FHC(CRL-1831)购自美国模式培养物集存库(Americantypeculturecollection, ATCC)；CRC细胞系SW480(CBP60019)、SW620(CBP60036)、DLD-1(CBP60037)和HCT116(CBP60028)购自南京科佰生物科技有限公司，均经过STR分型鉴定且鉴定无误。细胞均使用ATCC推荐的培养基培养，培养基均补充有10%胎牛血清、1%双抗和1%L-谷氨酰胺，并置于37℃、5%CO2细胞培养箱。

    1.1.2 质粒：β-catenin、RGS13过表达质粒购自武汉淼灵生物科技有限公司。慢病毒法构建稳定转染的细胞株。将适量293T细胞接种于6孔板中，使用PolyJetTMDNA体外转染试剂按照说明书操作。使用工作浓度的嘌呤霉素筛选稳定转染的细胞。

    1.1.3 抗体：RGS13抗体(PA5-68626)购自美国ThermoFisher公司，β-catenin(51067-2-AP)、Flag(66008-4-Ig)、GAPDH(60004-1-Ig)抗体购自美国Proteintech公司 ......