孙浩，郑涌泉，徐梦瑾

    浙江大学医学院附属妇产科医院 药剂科，浙江 杭州 310006

    目前，在世界范围内宫颈癌是第四大常见的女性癌症，是严重威胁女性健康的恶性肿瘤。中医认为宫颈癌属崩漏、带下、癥瘕等范畴，其主要病因是脏腑气血失调、冲任受损，治疗当以活血化瘀，补气扶正为主[1]。黄芪、莪术配伍起到补气化瘀的作用，这与宫颈癌患者机体的病证是相对应的。尽管目前黄芪、莪术的有效成分被不断发现，但鲜有从整体角度研究黄芪-莪术的配伍机制。黄芪、莪术的多种有效成分及其整体协同的作用特点是治疗宫颈癌的优势所在。因此，本研究旨在通过生物信息学、GO聚类和k-核分解等方法识别黄芪-莪术诱导宫颈癌细胞凋亡的靶网络，同时通过K-means聚类、分子对接和TOPSIS法确定潜在有效成分和关键靶点，通过CCK-8法、TUNEL染色、流式细胞术以及Western blot等方法探讨其诱导凋亡的作用及整体配伍机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验细胞：宫颈癌SiHa细胞由浙江大学医学院提供，培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37 ℃、含5%的CO2加湿恒温培养箱中培养，并每周传代2次。

    1.1.2 药物与试剂：黄芪、莪术中药材购自杭州华东中药饮片有限公司。DMEM培养液、胎牛血清和0.25%胰蛋白酶-EDTA购自美国Gibco公司。细胞培养瓶、6孔板、12孔板、96孔板和巴斯德吸管购自美国Corning公司。PBS购自杭州诺森德生物技术有限公司。CCK-8试剂盒、细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒、PMSF、BCA蛋白检测试剂盒、RIPA裂解缓冲液和TBST购自合肥白鲨生物科技有限公司。TUNEL试剂盒、DAPI染色液购自上海碧云天生物技术有限公司。p53、β-catenin和GAPDH小鼠单克隆抗体购自武汉赛维尔生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 宫颈癌疾病背景网络的构建：从Disgent(https://www.disgenet.org/)、OMIM(https://omim.org/)、KEGG(https://www.kegg.jp/)、TTD(http://db.idrblab.net/ttd/)和RGD(https://rgd.mcw.edu/)等数据库收集宫颈癌相关蛋白。将这些蛋白映射到String(https://string-db.org/)数据库构建宫颈癌疾病生物总网络。通过Metascape(https://metascape.org/)对这些蛋白进行GO富集分析 ......