李梦婷，蒋黛西，张建斌，魏建东，陈长喜，李红亮

    1.宁波大学附属人民医院 消化内科，浙江 宁波 315000；2.上海交通大学医学院附属新华医院 消化内科，上海 200092；3.上海市宝山区中西医结合医院 急诊科，上海 201900

    非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)在全球患病人数不断增加，非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)是其严重类型[1]。脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase, PREP)是一种能特异性水解神经活性肽、小肽类激素和多种细胞因子的丝氨酸蛋白酶，在肝脏中活性较高[2-3]。笔者前期体内体外实验均证实肝细胞脂肪变时伴PREP活性升高[2-4]，抑制PREP活性[2]或PREP表达缺失[5]均可抑制肝细胞脂肪变，提示抑制PREP对NAFLD进展可能有保护作用。丙戊酸及其钠盐是目前世界上最常用的抗癫痫药物，有研究称长期服用丙戊酸对人体肝功能有一定的损害作用[6]，但同时丙戊酸有显著的PREP活性抑制作用[7-8]，它对NAFLD进展的影响目前鲜见报道。本研究采用高脂高胆固醇饮食构建小鼠NAFLD模型，并用具有PREP活性抑制功能的丙戊酸钠进行干预，观察其对NAFLD进展的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：42 只雄性7～8 周龄，体质量18～20 g，无特殊病原体野生型C57BL/6J小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，生产许可证：SCXK(沪)2012-0002。

    1.1.2 主要试剂：高脂高胆固醇饲料(10%猪油+2%胆固醇+88%基础饲料，总热卡4.8 kcal/g)购自南通特洛菲饲料科技有限公司；丙戊酸钠购自荷泽方明药业集团股份有限公司；底物Suc-Gly-Pro-AMC购自瑞士BaChem公司；7-氨基-4-甲基香豆素(7-amino-4-methylcoumarin, AMC)购自美国Sigma-Aldrich公司；苏木精-伊红(HE)试剂盒购自北京索莱宝生物科技有限公司；兔抗小鼠PREP抗体购自美国Abcam公司；其他抗体均购自上海碧云天生物科技研究所。RT-qPCR和TRIzol试剂盒均购自日本Takara公司。

    1.2 方法

    1.2.1 动物模型制备：用标准饲料适应性饲养小鼠1周后，将小鼠分为对照组(15只)、模型组(10只)和干预组(17只)，对照组喂以普通饲料 ......