林颖，倪乐艺，余河杰，胡婷婷，蔡振寨，林李淼

    1.台州市第一人民医院 消化内科，浙江 台州 318020；2.温州医科大学附属第二医院 消化内科，浙江 温州 325088；3.温州医科大学附属第一医院 消化内科，浙江 温州 325015

    结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是最常见的实体瘤之一。根据2018年全球癌症统计报告，肺癌和乳腺癌是最常见的癌症(11.6%)，其次是CRC(10.2%)，而病死率最高的癌症是肺癌(18.4%)、CRC(9.2%)和胃癌(8.2%)[1]。WHO估计，到2030年，新诊断的CRC病例和与CRC相关的死亡人数将分别增加到77%和80%[2]。目前，手术联合术后化疗被认为是CRC的标准治疗方法。然而，不良反应和耐药性限制了CRC患者化疗的使用[3-4]。癌基因的激活或抑癌基因的失活引发或加速恶性肿瘤的进程[5]。随着测序技术的发展，CRC的靶向药物治疗越来越受到研究者的关注[6-7]。然而，到目前为止，尚未在CRC中发现成熟、明确的分子机制或预后指标。

    K12基因位于染色体17q25上CD7基因上游，经人类基因图谱研讨会(Human Gene Mapping Workshops, HGMW)批准命名为分泌型跨膜蛋白1(secreted and transmembrane 1, SECTM1)[8-10]。该基因全长14 kb，编码在外周血白细胞和乳腺癌细胞系中检测到的最显著的1.8 kb mRNA[10]。转染SECTM1基因的细胞表面可以检测到SECTM1，未转染的细胞中尚未发现[10-11]。SECTM1是一种广泛表达的INF诱导分子，作为T细胞激活的有效共刺激配体，与抗CD28抗体协同作用[12]。例如，SECTM1可作为T细胞的共刺激因子，受干扰素α(interferon-α,IFN-α)和IFN-γ的调控，在黑色素瘤细胞中表达显著上调[12]。SECTM1也与肿瘤进展和转移有关，在乳腺癌、前列腺癌细胞系和部分髓系白血病细胞中高表达[10-12]。然而，SECTM1表达在CRC中的生物学意义尚不清楚。本研究拟分析SECTM1表达与CRC的相关性以及SECTM1的生物学功能。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要材料和仪器：CEA-RIA试剂盒购自上海起发实验试剂有限公司；抗SECTM1抗体(AB106377)购自美国Abcam公司；山羊抗兔IgG、3，5-二氨基联苯胺(Diaminobenzidine，DAB)购自北京中山生物有限公司；6种人CRC细胞系(HCT116、RKO、Caco-2、HT-29、DLD-1和HCT-8)和正常人结肠上皮细胞系(NCM460)购自中国科学院上海细胞库；RPMI1640培养基购自美国Thermo Fisher Scientific公司；10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)购自美国Atlanta Biologicals Lawrenceville公司；GV367慢病毒载体购自上海吉凯基因化工科技有限公司；特异性慢病毒和阴性对照(negative control, NC)慢病毒包装质粒购自上海捷恩生物科技有限公司；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；荧光显微镜购自日本奥林巴斯公司；TRIzol购自上海普菲生物科技有限公司；Promega M-MLV试剂盒购自北京普罗梅加生物有限公司；SYBR Master Mixture购自北京宝日医生物技术有限公司；qRTPCR仪购自上海罗氏诊断产品有限公司；Western blot曝光仪购自广州博鹭腾生物科技有限公司；流式细胞仪分析购自北京安诺伦生物科技有限公司 ......