李辉，王娟，袁新华

    湖州市妇幼保健院 儿科，浙江 湖州 313000

    功能性便秘(functional constipation, FC)是指除外肠道或全身器质性疾病及药物性因素所引起的便秘，占儿童便秘的90%～95%，是儿童常见的功能性胃肠道疾病。目前全球儿童FC患病率为 9.5%，但4岁以下儿童的患病率更高，为17.5%[1]。FC在临床表现上主要为排便费力、排干硬便、排便不尽感，排便时肛门直肠堵塞感等。长期便秘严重影响儿童身心健康，尤其对于婴幼儿，影响其生长发育，并给患儿家长带来了沉重心理负担[2]。FC的发病病理生理机制复杂，目前确切病因尚未明确，可能与遗传、饮食、代谢、精神、肠道菌群等因素有关。随着核酸技术发展，16S rDNA序列测定可被用于细菌的分型鉴定，以及发现和描述新的细菌种类，因而被广泛用于肠道菌群的研究。本研究通过16S rDNA测序对0～3岁患有FC婴幼儿的肠道菌群进行研究，分析其菌群结构以及潜在的细菌生物标志物，旨在为指导临床干预与治疗提供依据。

    1 资料和方法

    1.1 一般资料 选取2020年1月至12月在湖州市妇幼保健院门诊就诊的0～3岁FC患儿17例作为观察组。纳入标准：符合2016年儿童功能性胃肠病罗马IV诊断标准[3]，年龄<4岁的儿童至少符合以下条件中2项，持续时间达1个月：①每周排便≤2次；②大量粪便潴留史；③有排便疼痛和排便费力史；④排粗大粪便史；⑤直肠内存在大量粪便团块；⑥接受排便训练，能控制排便后每周至少出现1次大便失禁；⑦粗大粪便曾堵塞抽水马桶。排除标准：①合并有严重的先天性畸形者；②合并有严重的恶性肿瘤者；③伴有严重血液性疾病者；④有消化道疾病及手术史；⑤甲状腺功能减低等内分泌疾病史；⑥1周内曾使用抗生素、粗纤维、多糖类食物及益生菌等微生态药物者。同期选取纳入儿保科常规体检及系统管理的排便正常的0～3岁婴幼儿15例做为对照组。患儿家属均自愿参加并签署知情同意书。本研究通过湖州市妇幼保健院伦理委员会批准(编号：2018-R-007)。

    1.2 主要仪器和试剂

    1.2.1 主要仪器：包括Eppendorf Centrifuge 5424的常温离心机，Microfuge R 22RCentrifuge的冷冻离心机，上海华利达公司WH-861 Vortex Shaker的旋涡震荡仪，杭州朗基科学仪器有限公司A200基因扩增仪以及上海天能公司REPS300的电泳仪等。

    1.2.2 主要试剂：包括上海仪涛生物仪器有限公司生产的货号为M0536L的Pusion Hot start flex 2X Master Mix ......