张杰，杨煜锋，胡婷婷，吴聪，杨子飞，吴贤敏

    温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.耳鼻咽喉-头颈外科；2.消化内科

    鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一种高侵袭性、转移性的恶性肿瘤，主要发生于鼻咽部黏膜上皮。西方国家和拉丁美洲的NPC发病率低于1/10万[1]。在东南亚、地中海盆地和中东地区，NPC发病率较高[2]。据报道，华南地区每年每10万人中有15～50名NPC患者[3]。在NPC的发展过程中，包括EB病毒感染、环境和遗传因素在内的许多因素可能起重要作用[2]。对于早期NPC，放疗是一种有效的治疗方法，而晚期NPC因颅底及颈部淋巴结的侵袭转移，预后较差[4]。

    众所周知，PI3K/AKT信号通路在肿瘤中控制着重要的细胞生物学过程，包括维持蛋白合成、细胞生存、生长、转移、凋亡、自噬、代谢、血管生成和细胞周期调控[5]。AKT抑制剂单独使用或与其他化疗药物联合使用均可有效抑制肿瘤生长[5-7]。 GSK2141795(也称GSK-795)是英国葛兰素史克公司开发的一种新型AKT抑制剂，目前正处于早期临床试验阶段，以评估其对多种类型癌症的治疗效果，如多发性骨髓瘤(NCT01989598)和乳腺癌(NCT01964924)。浙江大学药学院药物发现与设计研究所以GSK-795为原型通过基于结构的药物设计优化生成其3，4，6-三取代哌啶衍生物，简称E20，与GSK-795相比，E20对LNCaP、OVCAR-8和HCT116细胞表现出更强的AKT抑制和抗增殖活性[8]。

    在前期研究的基础上，我们将E20应用于CNE-2细胞，研究其是否能抑制CNE-2细胞的增殖，并探讨其可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料 E20由浙江大学药学院药物发现与设计研究所提供；人NPC细胞系CNE-2购自中科院上海生物科学研究所细胞库。DMEM培养基购自美国Gibco公司；青霉素G购自美国Sigma公司；CCK-8试剂盒购自北京Protein Biotechnology公司；Mito-SOX试剂盒购自美国Life Technologies公司；AnnexinVFITC/PI凋亡检测试剂盒购自美国BD Biosciences公司；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒购自美国Bio-Rad公司；ECL显色液购自美国Abcam公司；一抗、二抗均购自美国Sigma公司；戊二醛、锇酸及乙酸铀酰均购自美国Sigma-Aldrich公司；丙酮购自国药集团化学试剂有限公司；环氧树脂购自英国TAAB公司；枸橼酸铅购自美国Polysciences公司 ......