梅蕾，汤旗，厉柳岑，段荣清，沈耀

    温州医科大学 检验医学院(生命科学学院)，浙江 温州 325035

    脑胶质瘤占成人恶性原发性脑肿瘤的75%，脑胶质瘤是起源于神经胶质细胞或前体细胞的神经外胚层肿瘤，包括星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤和室管膜瘤[1]。由于肿瘤的快速和不受控制的增殖限制了O2的供给，血氧供应不足或缺氧是几乎所有实体肿瘤的典型微环境特征，而缺氧是脑胶质瘤的一个标志，组织学上表现为伪栅栏型坏死和血管增生的病理学特征[2]。肿瘤细胞在适应缺氧的同时，导致更具侵袭性和治疗耐药性的肿瘤表型。缺氧诱导 基因表达变化和随后的蛋白质组学变化对各种细胞和生理功能有许多重要影响，最终导致患者预后极差[3]。

    二甲双胍是双胍家族的一员，是治疗2型糖尿病最常用的口服降血糖药物，近年来的研究发现其具有抗肿瘤作用[4]。二甲双胍作为一种疏水性药物，可以轻松穿过血脑屏障[5]。通过大量的临床试 验，已被证实二甲双胍可以抑制白血病、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌细胞的生长[6-7]， 但具体机制目前仍不清楚。本研究分析了在常氧和低氧条件下二甲双胍对人脑胶质瘤细胞活力、增殖和代谢等的影响，为深入分析二甲双胍在脑胶质瘤治疗中的作用机制提供重要的实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞：人脑胶质瘤细胞系U251购自中国典型培养保藏中心(武汉)。

    1.1.2 主要试剂：二甲双胍、MTT粉末、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术研究所；Cell-Light EdU Apollo567 In Vitro Kit试剂盒购自广州锐博生物科技有限公司；细胞周期检测试剂盒购自南京凯基生物技术股份有限公司；乳酸检测试剂盒购自南京建成生物技术研究院；ATP检测试剂盒(S0026)购自上海碧云天生物技术研究院；甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenaseh, GAPDH)抗体(db106,Human)、肌动蛋白(beta-actin, β-actin)抗体(db13796, Human)、葡萄糖转运蛋白(glucose transporter 1, GLUT1)抗体(db384, Human)和原癌基因(c-Myc-binding protein, c-Myc)抗体(db1667,Human)购自杭州戴格生物技术有限公司。

    1.1.3 细胞培养：脑胶质瘤细胞在含有10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)(澳洲CLARK公司)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)培养基(美国Gibco公司)中培养 ......