沈冰燕，王敏，方叶楠，代琴，谢琪琦，吴文灿

    1.温州医科大学 眼视光学院(生物医学工程学院)，浙江 温州 325035；2.温州医科大学附属眼视光医院，浙江 温州 325027

    外伤性视神经病变(traumaticoptic neuropathy, TON)又称视神经损伤，主要是因颅脑及额面部遭受外力撞击后直接或间接导致的视神经损伤，是一种重要的致盲性眼病，在头面颅脑复合伤患者中的发病率为0.5%～5%[1-2]。因其损伤靶点明确、病程进展快等特点常作为视神经损伤研究的理想病种，目前尚无有效的治疗方法[3]。既往研究[4-6]表明视神经损伤后轴突再生修复困难，视神经损伤导致轴突断裂会引起视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)的凋亡[7-8]，且RGCs的损伤及丢失存在一定的时间累积效应，因此对于视神经损伤后不同时间点RGCs和轴突丢失情况的评估有利于治疗时间的选择。在本研究中，通过构建小鼠视神经钳夹损伤(optic nerve crush,ONC)模型，探究视神经损伤后不同时间的RGCs和轴突数量的动态变化，了解视神经损伤的病理过程，从而进一步寻找视神经损伤后治疗干预的适宜时机。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：20只SPF级健康C57BL/6J小鼠，1月龄，体质量12～15 g，由温州医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK(浙)2018-0017。

    1.1.2 药品与主要试剂：盐酸塞拉嗪注射液 (2 mL/支)购自长春华牧动物保健品有限公司；舒泰?20购自法国维克公司；复方托吡卡胺滴眼液购自邯郸康业制药有限公司；盐酸丙美卡因滴眼液购自德国爱尔康公司；氧氟沙星眼膏购自沈阳兴齐制药有限公司；4%多聚甲醛购自北京兰杰柯科技有限公司；曲拉通X-100(Triton-X100)购自北京索莱宝科技有限公司；山羊血清购自北京中杉金桥生物技术有限公司；封闭液配置：Triton-X1000.05 mL， 山羊血清0.5 mL，加9.5 mL 0.01 mol/L PBS；RBPMs抗体、山羊抗兔IgG抗体购自英国Abcam公司；2.5%戊二醛电镜专用固定液购自福州飞净生物科技有限公司；对苯二胺(PPD)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；甲醇、丙酮与异丙醇购自上海国药集团化学试剂有限公司。

    1.1.3 主要仪器：显微手术器械购自上海金钟金属制品厂；反向镊购自瑞士Dumont公司；眼科手术显微镜购自德国徕卡公司；3D玻片扫描仪购自匈牙利3D HISTECH公司；活细胞转盘共聚焦显微镜购自德国蔡司公司；小动物视网膜显微成像系统购自上海辅光精密仪器有限公司 ......