段荣清，厉柳岑，汤旗，梅蕾，沈耀

    温州医科大学 检验医学院(生命科学学院)，浙江 温州 325035

    胶质瘤是常见的原发性颅内肿瘤之一，也是最具侵袭性和最致命的脑肿瘤，分为不同的级别和组织学亚型[1]。流行病学表明胶质瘤发生在各个年龄段，但以成年人多见，男性比女性更容易患病[2]。 目前，胶质瘤的治疗主要通过手术切除和辅助放化疗。胶质瘤肿瘤细胞向周围正常组织明显侵袭性和浸润增殖大大降低了治疗效果，导致患者预后恶化，5年病死率超过90%[3-5]。肌肽是一种天然存在的二肽，广泛分布在肌肉、大脑等可兴奋组织中，具有多种有益作用，包括抗氧化、抗糖化、离子螯合剂、伤口愈合促进剂和自由基清除剂[6]。研究[7]表明，肌肽具有抑制体内恶性细胞生长的潜力，被视为潜在的抗癌药物。为了明确肌肽对胶质瘤的抗肿瘤作用，本研究探讨了常氧和低氧条件下肌肽对人脑胶质瘤细胞增殖的影响及其潜在的分子机制，为胶质瘤的临床治疗提供新思路。

    1 材料和方法

    1.1 细胞培养人胶质瘤细胞系U251和U87分别购自中国典型培养物保藏中心和中国科学院细胞生物学研究所。DMEM购自美国Gibco公司；FBS购自澳洲CLARK公司；L-Glutamine(100×)和青霉素-链霉素(100×)购自上海碧云天生物技术有限公司。U251和U87细胞均在补充有10% FBS、1% L-谷氨酰胺和1%青霉素链霉素的DMEM中培养。用DMEM溶解肌肽并配置成500 mmol/L的溶液。细胞样本分为常氧组、常氧+肌肽组、低氧组、低氧+肌肽组。常氧和低氧组加入适量完全培养基后分别放入常氧培养箱(21% O2、5% CO2、37 ℃)和低氧培养箱(1% O2、5% CO2、 37 ℃)中继续培养。常氧+肌肽组和低氧+肌肽组根据实验所需肌肽浓度加入药物，然后加入适量完全培养基后分别放入常氧培养箱和低氧培养中继续培养。

    1.2 试剂和仪器肌肽购自中国生工生物科技公司；MTT粉末购自上海碧云天生物技术有限公司；DMSO购自北京索莱宝科技有限公司。一抗试剂包括：c-Myc(1:1000，美国Abcam公司)，L-型氨基酸转运蛋白1(L-type amino acid transporter 1, LAT1)(1:1000，美国Affinity公司)，β-actin(1:1000，上海碧云天生物技术有限公司)。仪器主要包括酶标仪Varioskan flash(美国赛默飞公司)、流式细胞仪CytoFLEX(美国贝克曼公司)、超高效液相 Acquity UPLC H-Class/Acquity UPLC IClass(美国Waters公司)、高分辨质谱Xevo-G2-XS QTOF(美国Waters公司)、低温高速离心机(德国Eppendorf公司)、Milli-Qs超纯水仪(德国Merck Millipore公司)、二氧化碳恒温细胞培养箱(美国赛默飞公司)、Galaxy 170R CO2培养箱(美国Eppendorf公司) ......