李思萍，韩金育，胡迪，王雅杰，于晓波

    1.温州医科大学 第一临床医学院(信息与工程学院)，浙江 温州 325035；2.国家蛋白质科学中心-北京(凤凰中心)北京蛋白质组研究中心，北京 102206；3.首都医科大学附属北京地坛医院 检验科，北京 100015；4.旦生(北京)医学科技有限责任公司，北京 102206

    肝癌是高度致命的恶性肿瘤之一[1]，肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的原发性肝癌。当前，常用于肝癌诊断的血清学标志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)虽被广泛应用，但应用存在局限性[2-3]。肝癌相关指南建议对AFP阴性人群可以增加检测异常凝血酶原(desγ-carboxy-prothrombin,DCP)、甲胎蛋白异质体3(alpha-fetoprotein lens culinaris agglutinin 3,AFP-L3)、miRNA(microRNA)检测试剂盒和GALAD模型等，从而提高肝癌检出率，但可能由于灵敏度或特异度有限、检测成本高等原因，仍未广泛应用于临床，迫切需要探索新型有效标志物来提供肝癌相关肿瘤信息。受体酪氨酸激酶AXL、软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是近年来分别被发现，并经临床样本验证的新型肝癌标志物，联合AFP检测可以提高肝癌诊断性能[4-6]。但多数研究只是针对其中一种标志物与AFP联合检测，以上三项标志物与AFP结合对肝癌的诊断价值鲜见报道。以往这几种标志物的检测多采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)[7-9]，但ELISA样本用量大、操作繁琐且不能实现多重检测。流式荧光技术利用不同荧光编码微球实现单次实验多项标志物同时检测，其检测灵敏度高、特异性强、分析速度快、标志物组合灵活等优势[10-11]，可以节约试剂用量和人力成本。本研究基于流式荧光技术建立多重肝癌标志物检测方法，并进行检测性能分析，筛选肝癌血清样本进行临床验证并初步探讨四项标志物对肝癌的诊断价值。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本：标本取自2019年6月至2022年1月在首都医科大学附属北京地坛医院被诊断为HCC的患者及同期体检的健康对照者。训练队列有30例健康对照者(男/女：21/9，年龄21～83岁)和30例HCC患者(男/女：23/7 ......