黄义星，郑镇誉，徐国潮，邹盛涛

    温州医科大学附属第二医院 骨科，浙江 温州 325027

    现代骨科学的创立与进步，离不开金属内植入物的参与。但是骨内植入物引发的相关感染让广大临床医护人员感到非常棘手。四肢骨折手术后的相关感染发生率为5%～15%，脊柱手术后的相关感染发生率也高达2%～5%[1]。感染一旦发生，处理非常麻烦，局部应用抗生素也成为越来越多临床医师的首选方法[2]。骨内植入物表面抗菌涂层设计是在不改变骨内植入物基本结构和力学性能的前提下，赋予其缓释抗生素的功能[3]。且研究人员目前在响应性药物缓释方面取得了一定的进展，包括酶、pH、光、热和温度响应等[4-5]。相关研究显示，骨内植入物相关感染的发生主要与金黄色葡萄球菌相关，而其感染与繁殖会大量释放透明质酸酶、链激酶和血浆凝固酶等[6]。本研究期望用细菌感染后产生的透明质酸酶自动降解抗菌涂层中的透明质酸(hyaluronic acid,HA)，从而促成抗生素的释放，实现涂层的智能响应性缓释效果。

    1 材料和方法

    1.1 材料 蒙脱土(montmorillonite,MMT)购自山东优索化工科技有限公司；透明质酸和万古霉素(vancomycin,VA)购自西安普瑞斯生物工程有限公司；原子力显微镜(FM-NanoviewRa-AFM)购自苏州飞时曼精密仪器有限公司；扫描电镜(SEM3300)购自北京大束科技有限责任公司；金黄色葡萄球菌购自上海抚生实业有限公司；鬼笔环肽和DAPI购自北京索莱宝科技有限公司；克氏针购自东莞市联顺精密金属材料有限公司；椭圆偏振光谱仪(UVISEL Plus)购自苏州上器试验设备有限公司；共聚焦显微镜(LSM900)购自北京普瑞赛司仪器有限公司；核酸蛋白检测仪(HD-2000)购自深圳三莉科技有限公司；MC3T3细胞购自上海通派生物科技有限公司；TNF-α ELISA试剂盒、碱性磷酸酶试剂盒、钾离子检测试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；硅片购自苏州晶矽电子科技有限公司；涂菌棒购自北京龙谷天成科技发展有限公司；透明质酸酶购自上海弘顺生物科技有限公司；生化培养箱(LRH-250)购自上海瑞稳仪器设备厂；SD大鼠购自南京君科生物工程有限公司[SCXK(沪)2018-0006]。

    1.2 方法

    1.2.1 聚合物抗菌涂层的制备：0.5 g MMT溶解于200 mL去离子水中，获得浓度为2.5 mg/mL，放置在磁力搅拌器上(60 r/min)搅拌24 h后，在4 ℃冰箱中静置1周。同样方法配置HA溶液，浓度为2 mg/mL ......