沈红枫，查渭，金志江，夏海江，刘龙斌

    绍兴文理学院附属医院 绍兴市立医院 心血管内科，浙江 绍兴 312000

    血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensinaldosterone system,RAAS)重要的效应分子之一，可调节多种细胞因子的表达，在生理条件下维持心血管系统的内稳态，在调控血管内皮细胞功能状态中具有重要的作用[1]。在病理条件下，Ang II通过激活多条信号通路来参与血管内膜增生、心肌肥大、心脏重塑等心血管疾病的发生与发展，而使用血管紧张素受体抑制剂(如缬沙坦)能显著延缓上述病理过程[2]。研究[3]显示Ang II可以通过引发微血管通透性增加，从而参与多种心血管疾病的进展，但是其破环微血管的具体机制目前尚未阐明。

    血管内皮细胞屏障的完整性是维持正常血管通透性的基础。血管内皮细胞之间存在着许多紧密连接。这些紧密连接常围绕细胞的顶端并呈连续带状，使相邻的内皮细胞紧密连接在一起，填充细胞间隙，形成一道天然的物理屏障，起着维持细胞内环境稳态、选择性通透等细胞基本功能的作用[4]。紧密连接相关跨膜蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)是细胞间紧密连接的主要成分，其在内皮细胞中的表达和分布对内皮细胞紧密连接的功能具有决定性的作用[5]。孙瑞等[6]发现通过微小RNA干预内皮细胞进而调控其ZO-1蛋白的表达升高，能有效抑制缺氧导致的血管通透性增高。同时，有研究[7]表明雷公藤内酯干预在增加ZO-1蛋白表达的同时可以提高结肠内膜的紧密连接数量。本研究拟通过细胞实验检测Ang II对内皮细胞中ZO-1表达及分布的影响，以及血管内皮钙粘连蛋白(vascular endothelialcadherin,VE-cadherin)在其中的作用，以期探究Ang II破环微血管内皮细胞屏障的可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料 M199培养液、胰蛋白酶购自美国Sigma公司；胎牛血清购自美国GIBCO公司；RNA提取试剂购自美国Invitrogen公司；Takara反转录试剂盒购自大连宝生物公司；SYBR Green荧光染料试剂盒购自美国Roche公司；兔或鼠抗人ZO-1、VE-cadherin、β-actin多克隆抗体和辣根过氧化酶标记的二抗购自美国ABCAM公司；脂质体2000购自美国Invitrogen公司；蛋白质印迹(Western blot)相关试剂购自上海碧云天生物技术有限公司；VE-cadherin过表达质粒由上海吉玛制药技术有限公司设计合成 ......