王晓武，朱仙懂，王永强，吴志炫，温知楷，吴大洲，陈吉彩

    温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.肝胆胰外科；2.甲状腺外科；3.乳腺外科；4.疝与腹壁外科

    皮瓣移植是修复外伤、肿瘤切除、下肢血管性溃疡或糖尿病引起的皮肤缺损的重要外科技 术[1-3]，但是移植后的皮瓣坏死仍是问题[4-5]；而目前国内外的主流观点是认为皮瓣的坏死是由血流再灌注不足、回流阻塞以及缺血再灌注损伤所引起的，而后者会引发皮瓣组织循环障碍、活性氧物质大量生成等系列问题[5]。这将会影响皮瓣组织和细胞的形态和功能，以及细胞“微环境”-细胞因子的变化。机体内细胞因子是一个复杂的网络关系，每种因子的作用不可忽视，因此探讨每种因子的作用将有助于多层次的了解缺血随意皮瓣存活与生长因子的关系。有研究发现神经生长因子(nerve growth factor, NGF)能促进不同类型皮瓣的存活，并能促进移植皮瓣感觉恢复[6]，但是具体分子机制仍不详。本研究以大鼠糖尿病缺血随意皮瓣为代表模型，通过动物和细胞实验探讨NGF改善糖尿病大鼠随意皮瓣缺血坏死的分子机制，为NGF应用于糖尿病缺血随意皮瓣存活和防治提供理论支持。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物造模与分组 实验所需动物来自温州医科大学实验动物中心，动物许可证号：SYXK(浙)2021-0017。6～8周的240～320 g健康雄性Wistar大鼠40 只。饲养环境：5 只/笼，SPF环境(温度20～24 ℃，湿度50%～60%)下，用蒸馏水和优质实验饲料喂养。使动物适应环境1周后展开后续的动物实验。动物实验方案已通过温州医科大学实验动物伦理委员会审批(WYYY-AEC-2023-036)。建立I型糖尿病大鼠模型，40只大鼠注射1%链脲佐菌素(streptozotocin, STZ，65 mg/kg)[7]。在STZ注射前1天及注射后第3、5、7天，通过监测尾静脉血液中的血糖浓度是否超过16.67 mmol/L证实模型成功与否。I型糖尿病模型稳定后，随机分为DM组(20 只)、DM+NGF组(20只)。在I型糖尿病模型上，对2组大鼠建立改良McFarlane皮瓣模型[8]。建模流程：将所有大鼠利用异氟烷诱导和维持麻醉，将每只大鼠俯卧置于塑料板上，固定肢体，用剃刀进行背部备皮，范围为3 cm×9 cm，用亚甲蓝标记矩形随机皮瓣范围(宽3 cm、长9 cm)进行皮瓣模型建立，而皮瓣手术均由熟悉皮瓣移植的同一人完成。具体手术步骤：将皮肤和浅筋膜与深筋膜完全剥离 ......